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mlanfy

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助】毛细管电泳缓冲溶液浓度增加后样品迁移时间问题

我在做毛细管区带电泳实验时,经常遇见这样的情况:
增加缓冲溶液的浓度(比如磷酸盐70-120mM, pH5.5),碱性药物(确定以正离子形式存在)的迁移时间是缩短的。
这与很多毛细管电泳专著上所说的不一样,书上说:一般的,增加缓冲溶液的浓度,双电层压缩变薄,电渗流减小,样品的迁移时间也相应增加。
我在实验时不止一次遇见迁移时间缩短的现象,而且就这个问题我也反复重复了试验,保证我的实验人为误差很小。我同学也出现过这样的情况,而且我们用的电泳仪也是不一样的,这让我们很是想不通,投稿时审稿专家也提出这样的问题,我们也回答不出是为什么。
所以贴贴,集思广益,请大家帮忙分析一下,谢谢了!
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platto

木虫 (著名写手)

一窍不通

mlanfy(金币+1):依然感谢 2010-02-07 16:59
带电粒子在CZE中的电泳速度受多个因素影响,最重要的是电渗流、电场力,但是还有其他的作用力,如带电粒子间的相互作用,带电粒子和毛细管内壁的相互作用,这些对带电粒子在CZE中的电泳行为都有影响。所以,对于您的问题,我想可以在后两种作用上研究一下。
以上仅仅是个人观点。
七窍通了六窍
2楼2010-02-06 18:46:55
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platto

木虫 (著名写手)

一窍不通

关于这个问题,建议楼主先研究一下离子强度增大对EOF的影响,然后算算带电粒子的绝对电渗流变化。
七窍通了六窍
3楼2010-02-06 18:49:11
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platto

木虫 (著名写手)

一窍不通

还有,楼主能否考虑一下更换一下buffer,磷酸盐缓冲体系一般用了摸索pH的条件,在真正电泳的时候,最好不用磷酸盐缓冲体系。
七窍通了六窍
4楼2010-02-06 18:51:12
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mlanfy

铜虫 (小有名气)

楼上的同学很热情,但是对解决问题没有帮助,不过还是谢谢你了!
“一般的,增加缓冲溶液的浓度,双电层压缩变薄,电渗流减小,样品的迁移时间也相应增加。”这句话很有权威性。
而卧遇到的问题正是相悖于这句话的,固然实验出现异常现象是很有意义的!但是本人对异常现象真不知道怎么解释!
不仅磷酸盐出现这样的现象,硼酸盐也出现过,我一同学用硼酸盐现象更不好解释,增加缓冲溶液的浓度,样品迁移速度先减小后增大
5楼2010-02-07 16:38:22
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mlanfy

铜虫 (小有名气)

虽说磷酸盐有积累效应,但是磷酸盐也有其自己的优点,大浓度的磷酸盐有好的分离效果,低检出限,本人经验。
至于积累效应,可以频繁用NaOH、水冲柱即可解决。
6楼2010-02-07 16:42:45
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platto

木虫 (著名写手)

一窍不通

楼主看来是刚刚接触CE吧?
居然不理解是什么意思吗?
你的问题不能靠推理解决,只能去设计一系列的试验,由实验数据结合CE基本理论去探索。
金币我不需要的。
七窍通了六窍
7楼2010-02-08 08:14:45
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platto

木虫 (著名写手)

一窍不通

★ ★ ★ ★ ★
wingcat(金币+5):需不需要都很辛苦。 2010-02-09 22:25
楼主千万不要忽视一个问题,碱性物质,如生物碱、碱性蛋白质的电泳行为是比较特殊的。
七窍通了六窍
8楼2010-02-08 12:34:28
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mlanfy

铜虫 (小有名气)

★ ★
wingcat(金币+2):淡定,淡定:) 2010-02-09 22:25
我接触电泳3年了,以第一作者发表SCI共5篇
我的问题很简单,非常简单的区带电泳,没有添加任何添加剂,请问我需要设计什么实验,一般而言,咱们研究一个条件的影响时,一般说是固定其他条件(化学计量学方法除外),我做缓冲溶液浓度影响时,固定其他条件,出现了上述的异常现象,这个异常是指与书上权威冲突,如何解释?
9楼2010-02-08 13:38:12
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mlanfy

铜虫 (小有名气)

我的分析物很简单,是甲基苯丙胺和吗啡等这样结构很简单的物质,苯丙胺等此类物质是诸多研究电泳行为的首选样品。
10楼2010-02-08 13:40:37
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