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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 【求助】毛细管电泳缓冲溶液浓度增加后样品迁移时间问题
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mlanfy

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助】毛细管电泳缓冲溶液浓度增加后样品迁移时间问题

我在做毛细管区带电泳实验时，经常遇见这样的情况：
增加缓冲溶液的浓度（比如磷酸盐70-120mM, pH5.5），碱性药物（确定以正离子形式存在）的迁移时间是缩短的。
这与很多毛细管电泳专著上所说的不一样，书上说：一般的，增加缓冲溶液的浓度，双电层压缩变薄，电渗流减小，样品的迁移时间也相应增加。
我在实验时不止一次遇见迁移时间缩短的现象，而且就这个问题我也反复重复了试验，保证我的实验人为误差很小。我同学也出现过这样的情况，而且我们用的电泳仪也是不一样的，这让我们很是想不通，投稿时审稿专家也提出这样的问题，我们也回答不出是为什么。
所以贴贴，集思广益，请大家帮忙分析一下，谢谢了！
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1楼 2010-02-06 17:23:48
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platto

木虫 (著名写手)

一窍不通
mlanfy(金币+1):依然感谢 2010-02-07 16:59
带电粒子在CZE中的电泳速度受多个因素影响，最重要的是电渗流、电场力，但是还有其他的作用力，如带电粒子间的相互作用，带电粒子和毛细管内壁的相互作用，这些对带电粒子在CZE中的电泳行为都有影响。所以，对于您的问题，我想可以在后两种作用上研究一下。
以上仅仅是个人观点。
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七窍通了六窍
2楼2010-02-06 18:46:55
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platto

木虫 (著名写手)

一窍不通
关于这个问题，建议楼主先研究一下离子强度增大对EOF的影响，然后算算带电粒子的绝对电渗流变化。
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七窍通了六窍
3楼2010-02-06 18:49:11
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platto

木虫 (著名写手)

一窍不通
还有，楼主能否考虑一下更换一下buffer，磷酸盐缓冲体系一般用了摸索pH的条件，在真正电泳的时候，最好不用磷酸盐缓冲体系。
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七窍通了六窍
4楼2010-02-06 18:51:12
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mlanfy

铜虫 (小有名气)
楼上的同学很热情，但是对解决问题没有帮助，不过还是谢谢你了!
“一般的，增加缓冲溶液的浓度，双电层压缩变薄，电渗流减小，样品的迁移时间也相应增加。”这句话很有权威性。
而卧遇到的问题正是相悖于这句话的，固然实验出现异常现象是很有意义的！但是本人对异常现象真不知道怎么解释！
不仅磷酸盐出现这样的现象，硼酸盐也出现过，我一同学用硼酸盐现象更不好解释，增加缓冲溶液的浓度，样品迁移速度先减小后增大
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5楼2010-02-07 16:38:22
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mlanfy

铜虫 (小有名气)
虽说磷酸盐有积累效应，但是磷酸盐也有其自己的优点，大浓度的磷酸盐有好的分离效果，低检出限，本人经验。
至于积累效应，可以频繁用NaOH、水冲柱即可解决。
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6楼2010-02-07 16:42:45
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platto

木虫 (著名写手)

一窍不通
楼主看来是刚刚接触CE吧？
居然不理解是什么意思吗？
你的问题不能靠推理解决，只能去设计一系列的试验，由实验数据结合CE基本理论去探索。
金币我不需要的。
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七窍通了六窍
7楼2010-02-08 08:14:45
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platto

木虫 (著名写手)

一窍不通
★ ★ ★ ★ ★
wingcat(金币+5):需不需要都很辛苦。 2010-02-09 22:25
楼主千万不要忽视一个问题，碱性物质，如生物碱、碱性蛋白质的电泳行为是比较特殊的。
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七窍通了六窍
8楼2010-02-08 12:34:28
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mlanfy

铜虫 (小有名气)
★ ★
wingcat(金币+2):淡定，淡定：） 2010-02-09 22:25
我接触电泳3年了,以第一作者发表SCI共5篇
我的问题很简单，非常简单的区带电泳，没有添加任何添加剂，请问我需要设计什么实验，一般而言，咱们研究一个条件的影响时，一般说是固定其他条件（化学计量学方法除外），我做缓冲溶液浓度影响时，固定其他条件，出现了上述的异常现象，这个异常是指与书上权威冲突，如何解释？
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9楼2010-02-08 13:38:12
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mlanfy

铜虫 (小有名气)
我的分析物很简单，是甲基苯丙胺和吗啡等这样结构很简单的物质，苯丙胺等此类物质是诸多研究电泳行为的首选样品。
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10楼2010-02-08 13:40:37
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