24小时热门版块排行榜    

查看: 587  |  回复: 10
当前主题已经存档。

jackiechan

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于是否要做TA克隆的问题

请教一下:想用pet载体对一段pcr得到的目的基因进行表达,一定得做TA克隆吗?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+1): 2010-02-03 19:04
不一定,可以直接连pet的。
2楼2010-02-03 18:38:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jackiechan

木虫 (小有名气)

是不是一定要用高保真酶?
3楼2010-02-03 18:49:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jackiechan

木虫 (小有名气)

还有个问题,TA克隆是不是用于测序,如果不用测序,是否不用TA克隆了?谢谢
4楼2010-02-03 20:52:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

地图蜗牛

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
不用TA克隆也可以测序,PCR产物也可以直接测序。TA克隆其实是为了方便,PCR后直接连结。

你可以在引物两端加上你要用的表达载体的酶切位点,直接连进表达载体,送连好的质粒去测序。
5楼2010-02-03 23:54:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

地图蜗牛

银虫 (小有名气)

片段多长?最好用高保真酶吧。我用普通酶也极少遇到错配的情况,在这方面,大家运气都很好。
6楼2010-02-03 23:56:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我是懒人

铁虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
不管做不做TA克隆都要测序。。。。不做TA可像楼上说的连到载体后再测序。但是测序这步不能省。。。。还是稳妥些比较好!
7楼2010-02-04 05:26:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

beenomics

至尊木虫 (著名写手)

游戏人间的拙劣的造梦师


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
T载体纯粹是为了克隆方便,对于刚开始做分子的人来说,用TA克隆会方便很多,因为PCR后酶切连入其它载体对于初学者好像出错的几率多一些。有时候PCR产物末端的酶切位点由于保护碱基不好,酶切效果不好就很难连接了。
在深深的迷茫中徘徊
8楼2010-02-04 09:23:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jackiechan

木虫 (小有名气)

谢谢各位指点,学习中
9楼2010-02-04 10:26:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主

关键在于你的保护碱基!!
10楼2010-02-04 10:39:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 jackiechan 的主题更新
普通表情 高级回复(可上传附件)
信息提示
请填处理意见