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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于是否要做TA克隆的问题
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jackiechan

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于是否要做TA克隆的问题

请教一下：想用pet载体对一段pcr得到的目的基因进行表达，一定得做TA克隆吗?
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1楼 2010-02-03 17:28:56
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
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amisking(金币+1): 2010-02-03 19:04
不一定，可以直接连pet的。
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2楼2010-02-03 18:38:28
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jackiechan

木虫 (小有名气)
是不是一定要用高保真酶?
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3楼2010-02-03 18:49:31
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jackiechan

木虫 (小有名气)
还有个问题，TA克隆是不是用于测序，如果不用测序，是否不用TA克隆了？谢谢
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4楼2010-02-03 20:52:39
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地图蜗牛

银虫 (小有名气)
★
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不用TA克隆也可以测序，PCR产物也可以直接测序。TA克隆其实是为了方便，PCR后直接连结。

你可以在引物两端加上你要用的表达载体的酶切位点，直接连进表达载体，送连好的质粒去测序。
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5楼2010-02-03 23:54:08
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地图蜗牛

银虫 (小有名气)
片段多长？最好用高保真酶吧。我用普通酶也极少遇到错配的情况，在这方面，大家运气都很好。
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6楼2010-02-03 23:56:12
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我是懒人

铁虫 (初入文坛)
★
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不管做不做TA克隆都要测序。。。。不做TA可像楼上说的连到载体后再测序。但是测序这步不能省。。。。还是稳妥些比较好！
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7楼2010-02-04 05:26:01
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beenomics

至尊木虫 (著名写手)

游戏人间的拙劣的造梦师
★
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T载体纯粹是为了克隆方便，对于刚开始做分子的人来说，用TA克隆会方便很多，因为PCR后酶切连入其它载体对于初学者好像出错的几率多一些。有时候PCR产物末端的酶切位点由于保护碱基不好，酶切效果不好就很难连接了。
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在深深的迷茫中徘徊
8楼2010-02-04 09:23:49
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jackiechan

木虫 (小有名气)
谢谢各位指点，学习中
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9楼2010-02-04 10:26:46
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
关键在于你的保护碱基！！
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10楼2010-02-04 10:39:42
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