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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 【求助/交流】我的蛋白为什么纯化不好啊！
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wlt728

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】我的蛋白为什么纯化不好啊！

请问各位XDJM，我的蛋白，在LB中诱导表达，纯化工艺稳定（在以前的实验室），但是在M9中诱导，按着原来的纯化工艺就不行了（出差到外地），这应该跟培养基没有关系吧！是不是有可能我的柱子不对啊？但是人家说是GE分装的！能有假的么？愁死我了，最近！请问，怎么才能知道是不是柱子的问题呢？

[ Last edited by wlt728 on 2010-2-2 at 12:14 ]
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I am not a hero , but I served with heroes！
1楼 2010-02-02 12:07:55
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towindflower

新虫 (初入文坛)
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amisking(金币+2): 2010-02-02 17:42
纯化不好具体指什么，换菌株后会有问题出现的情况
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2楼2010-02-02 12:19:28
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qrf0704

铁虫 (小有名气)
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amisking(金币+1): 2010-02-02 17:42
很有可能你是买到假的GE的填料了。
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3楼2010-02-02 12:42:58
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jasco

木虫 (正式写手)
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amisking(金币+2): 2010-02-02 17:42
如果是不挂柱可能是填料问题，如果是表达不好，就可能是培养基换了，表达条件不合适，
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4楼2010-02-02 13:49:16
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hpp509

银虫 (初入文坛)
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amisking(金币+1): 2010-02-02 17:42
是包涵体纯化么？
可能和培养基改变有关系，在不同培养条件才，对于蛋白的性质可能有影响，导致你的纯化工艺不适宜。
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5楼2010-02-02 15:49:47
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wlt728

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
amisking(金币+2): 2010-02-02 17:43
我就是把LB培养基换成M9培养基，完了就是柱子换了，我是在外地做的，以前平衡时的条件都不会有目的蛋白出来了，结果这次就不是，难道培养基一换还会影响纯化工艺么！具体原因是什么啊
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6楼2010-02-02 17:37:19
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jasco

木虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
Originally posted by wlt728 at 2010-02-02 17:37:19:
我就是把LB培养基换成M9培养基，完了就是柱子换了，我是在外地做的，以前平衡时的条件都不会有目的蛋白出来了，结果这次就不是，难道培养基一换还会影响纯化工艺么！具体原因是什么啊

M9培养基比LB营养丰富很多，对你的表达肯定有影响。
我遇到过LB换成2YT培养基，蛋白表达条件就不同的情况。但是对纯化的影响倒不清楚。
平衡柱子时都有蛋白出来，说明柱子结合力弱，或者是上样量太大，你减少上样量试试看。
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7楼2010-02-03 09:57:48
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