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wlt728

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】我的蛋白为什么纯化不好啊!

请问各位XDJM,我的蛋白,在LB中诱导表达,纯化工艺稳定(在以前的实验室),但是在M9中诱导,按着原来的纯化工艺就不行了(出差到外地),这应该跟培养基没有关系吧!是不是有可能我的柱子不对啊?但是人家说是GE分装的!能有假的么?愁死我了,最近!请问,怎么才能知道是不是柱子的问题呢?

[ Last edited by wlt728 on 2010-2-2 at 12:14 ]
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towindflower

新虫 (初入文坛)

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amisking(金币+2): 2010-02-02 17:42
纯化不好具体指什么,换菌株后会有问题出现的情况
2楼2010-02-02 12:19:28
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qrf0704

铁虫 (小有名气)

★ ★
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amisking(金币+1): 2010-02-02 17:42
很有可能你是买到假的GE的填料了。
3楼2010-02-02 12:42:58
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jasco

木虫 (正式写手)

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amisking(金币+2): 2010-02-02 17:42
如果是不挂柱可能是填料问题,如果是表达不好,就可能是培养基换了,表达条件不合适,
4楼2010-02-02 13:49:16
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hpp509

银虫 (初入文坛)

★ ★
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amisking(金币+1): 2010-02-02 17:42
是包涵体纯化么?
可能和培养基改变有关系,在不同培养条件才,对于蛋白的性质可能有影响,导致你的纯化工艺不适宜。
5楼2010-02-02 15:49:47
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wlt728

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
amisking(金币+2): 2010-02-02 17:43
我就是把LB培养基换成M9培养基,完了就是柱子换了,我是在外地做的,以前平衡时的条件都不会有目的蛋白出来了,结果这次就不是,难道培养基一换还会影响纯化工艺么!具体原因是什么啊
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6楼2010-02-02 17:37:19
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jasco

木虫 (正式写手)


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引用回帖:
Originally posted by wlt728 at 2010-02-02 17:37:19:
我就是把LB培养基换成M9培养基,完了就是柱子换了,我是在外地做的,以前平衡时的条件都不会有目的蛋白出来了,结果这次就不是,难道培养基一换还会影响纯化工艺么!具体原因是什么啊

M9培养基比LB营养丰富很多,对你的表达肯定有影响。
我遇到过LB换成2YT培养基,蛋白表达条件就不同的情况。但是对纯化的影响倒不清楚。
平衡柱子时都有蛋白出来,说明柱子结合力弱,或者是上样量太大,你减少上样量试试看。
7楼2010-02-03 09:57:48
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