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维纳斯的骑士

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】请教,pYES2载体可以用于野生型啤酒酵母表达外源蛋白吗?

pYES2载体常和INVSc1营养缺陷型载体一起用来表达外源重组蛋白,它可以直接用于野生型啤酒酵母来做表达吗,当然肯定要先把野生型啤酒酵母做些改造,使其有筛选功能,大家认为这样可行吗、
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
应该可以。但你打算怎样获得营养缺陷的菌株呢
2楼2010-01-30 07:30:07
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zier1011

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
应该可以,INVSc1就是因为具有筛选功能——营养缺陷型,才用于做表达的。你要是能把野生型酵母改造成有筛选功能的,当然也可以,只不过你不用营养缺陷用什么呢?
花还香香的
3楼2010-01-30 09:19:02
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维纳斯的骑士

金虫 (小有名气)

把野生型啤酒酵母的一个基因敲除,在pYES2中带入敲除的基因后转入上述啤酒酵母菌株里表达筛选,这是我的试验思路,可行吗?
4楼2010-01-30 10:21:26
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gastrodia

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
可以,只要野生型的酵母能够筛选即可,一般做转基因都是通过互补实验的缺陷型来鉴定基因,然后通过转野生型来判断在内源基因存在的情况下,外源基因能够提供多大的贡献

[ Last edited by gastrodia on 2010-1-30 at 11:09 ]
5楼2010-01-30 11:08:20
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zier1011

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 维纳斯的骑士 at 2010-01-30 10:21:26:
把野生型啤酒酵母的一个基因敲除,在pYES2中带入敲除的基因后转入上述啤酒酵母菌株里表达筛选,这是我的试验思路,可行吗?

野生型酵母敲除基因后,形成菌株是营养缺陷型,而后可以用作表达菌株。你的实验思路理论上可行,但问题是你何必费这个劲儿?有现成的一样缺陷型菌株不用,自己费劲构建一株营养缺陷型菌株,目的是什么?如果你的目的是表达蛋白,则不必要这么费神费力,但是你如果目的是构建新型的用于表达的酵母缺陷型菌株,则可以尝试。
花还香香的
6楼2010-02-04 12:05:12
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维纳斯的骑士

金虫 (小有名气)

你说的很对,我试验的目的就是尝试做一个新型营养缺陷型酵母菌株,主要不是用于表达蛋白,虽然肯定要表达某个蛋白才能证明,呵呵
没办法,老板的想法我们只有想办法去做啦
7楼2010-02-04 14:02:12
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