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runxiaoli

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】酶切求助

各位大侠:
    你们好,最近我在做载体构建,做连接的时候出现问题了。连接转化后,挑取12个单菌落,摇菌,进行pcr鉴定,结果只有3个跑出目的条带,同时,还有一条非目的条带。然后对其中两个摇菌提质粒,双酶切,结果,只切出质粒带,无目的条带。请问有识之士,这是什么原因,非常期待您的解答,不胜感激。
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雨中蜗牛

金虫 (正式写手)

runxiaoli(金币+1):谢谢,我会好好研究一下的,非常感激。 2010-01-29 14:26
使用的双切嘛?要选择合适的共buffer,如果没有合适的可以分步酶切。还要看两个没的最适温度是不是一致,不一致的话也要分步切(一般都是37度,但也有特殊的)。
■如果如果有一天?k忘記了沵爾一定要記得曾經有一個傻孩子?圻^爾
3楼2010-01-28 21:26:47
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雨中蜗牛

金虫 (正式写手)

使用的双切嘛?要选择合适的共buffer,如果没有合适的可以分布酶切。还要看两个没的最适温度是不是一致,不一致的话也要分部切(一般都是37度,但也有特殊的)。
■如果如果有一天?k忘記了沵爾一定要記得曾經有一個傻孩子?圻^爾
2楼2010-01-28 21:25:37
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85715623

木虫 (正式写手)

runxiaoli(金币+1):非常感激,已经重新做了,希望一切顺利。 2010-01-29 14:26
这里面的原因可能比较多,比如PCR产物浓度,连接反应,转化效率都能影响。当然双酶切也要摸索一下,建议再来一次。
4楼2010-01-28 21:50:48
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