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木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】酶切求助

各位大侠：
你们好，最近我在做载体构建，做连接的时候出现问题了。连接转化后，挑取12个单菌落，摇菌，进行pcr鉴定，结果只有3个跑出目的条带，同时，还有一条非目的条带。然后对其中两个摇菌提质粒，双酶切，结果，只切出质粒带，无目的条带。请问有识之士，这是什么原因，非常期待您的解答，不胜感激。

1楼 2010-01-28 20:26:13

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金虫 (正式写手)

使用的双切嘛？要选择合适的共buffer，如果没有合适的可以分布酶切。还要看两个没的最适温度是不是一致，不一致的话也要分部切（一般都是37度，但也有特殊的）。

■如果如果有一天?k忘記了沵爾一定要記得曾經有一個傻孩子?圻^爾

2楼2010-01-28 21:25:37

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金虫 (正式写手)

runxiaoli(金币+1):谢谢，我会好好研究一下的，非常感激。 2010-01-29 14:26

使用的双切嘛？要选择合适的共buffer，如果没有合适的可以分步酶切。还要看两个没的最适温度是不是一致，不一致的话也要分步切（一般都是37度，但也有特殊的）。

■如果如果有一天?k忘記了沵爾一定要記得曾經有一個傻孩子?圻^爾

3楼2010-01-28 21:26:47

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木虫 (正式写手)

runxiaoli(金币+1):非常感激，已经重新做了，希望一切顺利。 2010-01-29 14:26

这里面的原因可能比较多，比如PCR产物浓度，连接反应，转化效率都能影响。当然双酶切也要摸索一下，建议再来一次。

4楼2010-01-28 21:50:48

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