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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于平端连接
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fxy0570

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】关于平端连接

大家好，我在做SmaI酶切载体做连接转化，我的目的片断是用T4 DNA 聚合酶补平的，载体是用SmaI酶切，纯化再去P酸化反应，纯化后用来做连接反应。鉴定连接的菌体发现在SmaI酶切位点处两侧的碱基也丢失了。丢失的片断
tcccgggggcggcc
或
cgggggcggccgcc
有谁做过类似的问题请多多指教！谢谢！
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1楼 2010-01-27 16:32:45
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xmchen1015

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
估计是由于T4 DNA polymerase 引起的，因为它有非常强的3`-5`外切酶活性，目的片段T4平端化后，建议再纯化一下以去除T4 polymerase
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3楼2010-01-28 14:40:58
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虫子火箭兵

金虫 (正式写手)
使用平末端酶切的试剂盒
那个比较好
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2楼2010-01-28 11:17:28
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fxy0570

金虫 (正式写手)
每步我都纯化的！
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4楼2010-01-29 08:20:35
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