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fxy0570

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】关于平端连接

大家好,我在做SmaI酶切载体做连接转化,我的目的片断是用T4 DNA 聚合酶补平的,载体是用SmaI酶切,纯化再去P酸化反应,纯化后用来做连接反应。鉴定连接的菌体发现在SmaI酶切位点处两侧的碱基也丢失了。丢失的片断
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有谁做过类似的问题请多多指教!谢谢!
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虫子火箭兵

金虫 (正式写手)

使用平末端酶切的试剂盒
那个比较好
2楼2010-01-28 11:17:28
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xmchen1015

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
估计是由于T4 DNA polymerase 引起的,因为它有非常强的3`-5`外切酶活性,目的片段T4平端化后,建议再纯化一下以去除T4 polymerase
3楼2010-01-28 14:40:58
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fxy0570

金虫 (正式写手)

每步我都纯化的!
4楼2010-01-29 08:20:35
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