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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 【求助/交流】大肠杆菌感受态制备的问题
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lipishun

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】大肠杆菌感受态制备的问题

各位大虾，我前几天做了一次感受态，使用buffer是Buffers:
Tfb-I:
30 mM KOAc; 50 mM MnCl2; 100 mM KCl; 10 mM CaCl2; 15 % (w/v) Glycerin.
Tfb-II:
10 mM Na-MOPS pH 7.0; 75 mM CaCl2; 10 mM KCl; 15 % (w/v) Glycerin.
在液氮速冻前取了100微升做转化，挺好的。可是液氮速冻后的，就一个菌落都不长。
请问我这个过程做错了什么？我应该怎么解决这个问题呢？
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1楼 2010-01-27 12:02:35
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挥汗如雨

至尊木虫 (职业作家)
★
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我们做好的感受态不进行液氮速冻，加完15%甘油直接放入-80低温冰箱保存就可以了。
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人生有三样东西不可挽回：时间，机遇，还有说出去的话。
2楼2010-01-27 12:48:46
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
我觉得这不是液氮速冻的问题，还是感受态制备的问题，可能你制得的这批感受态不能用了
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2010-01-27 13:18:31
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
在不加抗性的板子上涂布2ul看看是不是长。
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
4楼2010-01-27 13:29:44
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
怎么感受态buffer这么复杂，我制备细胞时只用预冷的CaCl2
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5楼2010-01-27 14:01:50
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feilr

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
不能速冻吧，一般是呈梯度降温吧
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6楼2010-01-27 15:13:51
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
速冻应该没有问题，提倡速冻缓融
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7楼2010-01-27 15:14:46
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luckydong1

铜虫 (小有名气)
★
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我也试过用液氮速冻，感觉比直接放入负80要好。是不是你转化的时候有失误？
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8楼2010-01-28 15:00:28
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lipishun

金虫 (小有名气)
做的过程没有失误，我师弟也帮我重复了。新鲜制备的，转化效率是很高的。
液氮速冻后再用一个也长不出来。比较纳闷。
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9楼2010-01-28 15:04:02
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