应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 【求助/交流】大肠杆菌感受态制备的问题
91/1返回列表
查看: 921  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

lipishun

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】大肠杆菌感受态制备的问题

各位大虾，我前几天做了一次感受态，使用buffer是Buffers:
Tfb-I:
30 mM KOAc; 50 mM MnCl2; 100 mM KCl; 10 mM CaCl2; 15 % (w/v) Glycerin.
Tfb-II:
10 mM Na-MOPS pH 7.0; 75 mM CaCl2; 10 mM KCl; 15 % (w/v) Glycerin.
在液氮速冻前取了100微升做转化，挺好的。可是液氮速冻后的，就一个菌落都不长。
请问我这个过程做错了什么？我应该怎么解决这个问题呢？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2010-01-27 12:02:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

挥汗如雨

至尊木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我们做好的感受态不进行液氮速冻，加完15%甘油直接放入-80低温冰箱保存就可以了。
赞一下(1人) 回复此楼
人生有三样东西不可挽回：时间，机遇，还有说出去的话。
2楼2010-01-27 12:48:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
我觉得这不是液氮速冻的问题，还是感受态制备的问题，可能你制得的这批感受态不能用了
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2010-01-27 13:18:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
在不加抗性的板子上涂布2ul看看是不是长。
赞一下(1人) 回复此楼
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
4楼2010-01-27 13:29:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
怎么感受态buffer这么复杂，我制备细胞时只用预冷的CaCl2
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2010-01-27 14:01:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feilr

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
不能速冻吧，一般是呈梯度降温吧
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2010-01-27 15:13:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
速冻应该没有问题，提倡速冻缓融
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2010-01-27 15:14:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luckydong1

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我也试过用液氮速冻，感觉比直接放入负80要好。是不是你转化的时候有失误？
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2010-01-28 15:00:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lipishun

金虫 (小有名气)
做的过程没有失误，我师弟也帮我重复了。新鲜制备的，转化效率是很高的。
液氮速冻后再用一个也长不出来。比较纳闷。
赞一下 回复此楼
9楼2010-01-28 15:04:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lipishun 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 5/250 2026-08-15 04:45 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊 +11 Tide man 2026-08-10 12/600 2026-08-15 02:12 by home3163
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 7lpolszZVXgi 2026-08-14 4/200 2026-08-15 01:08 by 4wMiSEwB6436
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 HFw0lei2R37i 2026-08-14 8/400 2026-08-15 00:16 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +5 Ldrop2023 2026-08-13 5/250 2026-08-14 18:48 by ssxclkj
[基金申请] filecode +6 cratir 2026-08-14 10/500 2026-08-14 18:29 by 笑叹辞穷
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +6 majunge000 2026-08-11 8/400 2026-08-14 14:44 by 医学老男孩
[论文投稿] 职称评审，求友友推荐见刊最快的期刊 +5 工厂打螺丝 2026-08-08 5/250 2026-08-14 11:03 by 玖戈弋
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭