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qianggene

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】植物转基因问题求助

给位虫友,我现在克隆到一个合成酶基因,由于总是拿不到5'端,所以缺失起始密码子,大概还差60个核苷酸就完整了,现在想做转基因,转烟草,听说可以转片段,而不需转全长,那小妹有个问题很困惑,如果转片段的话,转哪一段比较好,在选择片段的时候有什么原则吗?
谢谢各位虫友赐教!
可能是我说的不够具体,所以大家都没法给我解答,我再具体一下:我前段时间克隆一个基因,拿到这个基因的目的就是做转基因植株,本想拿到全长后再转,但总是做不出5'端,得不到起始密码子,所以我决定将现有的片段(大约1500bp左右)转入烟草,但怎么选择转哪一段,有没有什么原则,比如说选择功能保守区?还是随便选择一段编码区就可以?
希望我这样叙述后能让大家明白我的意思,帮我解答这个问题。小妹不胜感激!

[ Last edited by qianggene on 2010-1-26 at 09:30 ]
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hhwang

木虫 (小有名气)

★ ★
qianggene(金币+1): 1-26 11:17
司马诸葛(金币+1): 1-26 11:20
你是要吊基因还是只是克隆
如果是吊基因,有时会出现你说的这个问题
如果是克隆,那就是你引物设计有问题
片断可以转,但是必须你知道这个片断能发挥功能
总之 我觉得你问题太泛,要具体点
2楼2010-01-25 23:11:29
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匿名

用户注销 (著名写手)

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3楼2010-01-25 23:37:48
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

★ ★
qianggene(金币+1): 1-26 11:17
司马诸葛(金币+1): 1-26 11:20
一楼说的对,如果你想转片段,那么就必须是你转的片段可以发挥你想要的功能,从目前你差60多个氨基酸的情况看,我觉得转片段不是很可行,不过如果确实可以保证功能去能够行使功能,也可以试试。你先查一下你的基因功能域,然后看一下是否完整,如果完整可以考虑转片段,但是一般转片段都是把整个ORF转进去,所以你这样做希望其实很迷茫。这种情况还是建议你继续设计5‘RACE引物,将5’RACE跑出来,拿到全长,就万无一失了
4楼2010-01-26 09:44:32
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zjwang

木虫 (正式写手)

看你转基因的目的了,如果是看亚细胞定位,估计N端的一段就够了,如果是看功能最好是全长,或者是保守的功能域,问题是你没有N端,没有起始密码子,怎么启动你基因表达呢?
5楼2010-01-28 15:13:34
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