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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】高效液相色谱反相柱流动相问题
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【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 muchong5577 的 4 个金币

muchong5577

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】高效液相色谱反相柱流动相问题

准备做个HPLC看某个反应有产物、产物是什么。
不知道产物具体什么，但推断有可能是：



请问大家，用什么流动相好呢。谢谢！

[ Last edited by muchong5577 on 2010-1-25 at 21:06 ]
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1楼 2010-01-25 20:37:11
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
muchong5577(金币+1):谢谢 1-26 13:09
去化学板问问吧，知道的人会多一点
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2楼2010-01-26 09:49:20
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hugang2004_2000

木虫 (正式写手)
★
muchong5577(金币+1): 1-27 01:42
我觉得你的分析目的至少是要把产物和底物分开吧？那样的话，不给出来你的底物是什么，大家怎么好给你建议呢？如果你的目的就是看看这个纯化好的产物在液相里出峰时间是多少的话也没啥意思吧？嗬嗬
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3楼2010-01-26 20:51:22
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muchong5577

金虫 (正式写手)
反应后底物和产物没有进行分离，底物是1.6--二羟基萘酚
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4楼2010-01-27 01:42:25
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hugang2004_2000

木虫 (正式写手)
★
muchong5577(金币+1):谢谢 1-27 10:14
引用回帖:
Originally posted by muchong5577 at 2010-01-27 01:42:25:
反应后底物和产物没有进行分离，底物是1.6--二羟基萘酚

极性差得比较大，应该好分离吧，随便找个浓度的甲醇水估计就能分开，不过几个成分的极性都比较小，所以前提是你的样品在甲醇水中能溶解，上样前记得过滤，甲醇比例大点，含1%醋酸的70-80%甲醇应该就差不多吧。
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5楼2010-01-27 09:54:22
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muchong5577

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by hugang2004_2000 at 2010-01-27 09:54:22:

极性差得比较大，应该好分离吧，随便找个浓度的甲醇水估计就能分开，不过几个成分的极性都比较小，所以前提是你的样品在甲醇水中能溶解，上样前记得过滤，甲醇比例大点，含1%醋酸的70-80%甲醇应该就差不多吧。

昨天下午我用80%的甲醇跑了一次反相，出的峰与对照是一样的，而且都是单峰，但峰尖一个又小又矮，一个又大又高。
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6楼2010-01-27 10:18:11
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hugang2004_2000

木虫 (正式写手)
★
muchong5577(金币+1): 1-27 14:07
引用回帖:
Originally posted by muchong5577 at 2010-01-27 10:18:11:


昨天下午我用80%的甲醇跑了一次反相，出的峰与对照是一样的，而且都是单峰，但峰尖一个又小又矮，一个又大又高。

两个峰？对照品是什么？你的反应体系中应该还有第二个底物吧？否则那个加在4位的基团是怎么来的？
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7楼2010-01-27 10:27:28
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muchong5577

金虫 (正式写手)
对照就是把酶煮沸失活，然后加入反应物，温育数小时。
还有一个底物是几个C 的烯，这个东西在225nm处不会有吸收峰的。
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8楼2010-01-27 14:07:13
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hugang2004_2000

木虫 (正式写手)
★
muchong5577(金币+1): 2010-01-27 23:39
引用回帖:
Originally posted by muchong5577 at 2010-01-27 14:07:13:
对照就是把酶煮沸失活，然后加入反应物，温育数小时。
还有一个底物是几个C 的烯，这个东西在225nm处不会有吸收峰的。

跟对照一样的话，就说明没有反应呗？对不？
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9楼2010-01-27 17:48:32
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muchong5577

金虫 (正式写手)
嗯 ， 可能是酶复性没成功。
但还是不死心啊，换个条件。。。还要做次色谱看看。
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10楼2010-01-27 23:40:53
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