| 查看: 1298 | 回复: 7 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
【求助/交流】蛋白纯化失败了
|
|||
|
用Ni柱纯化的带Hisi标签蛋白，纯化率几乎为零，纯化后和纯化之前的蛋白样电泳条带几乎一样。杂蛋白太多了，纯化失败。我是这样做的：用Tris-Hcl （PH8.0 ）重悬菌体沉淀，超声破菌，取上清上样，因蛋白是可溶的。具体步骤： 纯水洗A、B管 A、B液分别洗A、B管道 上样 A液洗至基线平稳 B液洗脱 收集洗脱峰 另外：ni柱是实验室师姐留下的，不过已经再生过了。 怎么会出现这种情况，请大家帮忙分析一下，是我纯化方法不对吗？ |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有275人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
3楼2010-01-25 21:44:04
biowandy
木虫 (正式写手)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 4752.3
- 散金: 689
- 红花: 4
- 帖子: 627
- 在线: 157.8小时
- 虫号: 382870
- 注册: 2007-05-25
- 专业: 免疫学研究新技术与新方法
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
司马诸葛(金币+1): 1-26 11:00
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
司马诸葛(金币+1): 1-26 11:00
|
首先问你一个问题，你见到了洗脱峰没有？有没有实时检测仪仪器，比如国产核酸蛋白检测仪 或者是AKTA， 如果出现了峰值就是对的。 你是说b洗脱下来的部分电泳啥都没有， 还是有杂带？ 你没有表述清楚。 如果b洗脱的东西没有任何东西，说明没挂柱子， 另外用菌液直接电泳应该可以看到目的蛋白，一般重组蛋白都会很深的，比细胞本身的蛋白的含量高很多， 你首先要确认蛋白是否表达了。 如果表达了，就要考虑为啥不挂柱子？ 不挂柱子的现象很少，要么就是亲和柱有问题，要么就是你的蛋白的his没表达。有些构建的质粒 会意外终止， |
2楼2010-01-25 21:30:23
jasco
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 17 (小学生)
- 金币: 1626.1
- 红花: 3
- 帖子: 991
- 在线: 82小时
- 虫号: 287776
- 注册: 2006-10-21
- 专业: 生物化学
4楼2010-01-26 09:34:45
5楼2010-01-27 13:22:37
40