【求助/交流】我的Hela莫名的死了，请赐教 - 分子生物 - 综合其他

11楼2010-01-25 21:17:58

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cavafory

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Originally posted by fwks at 2010-01-25 19:19:10:
1、不知道你用的哪个牌子的国产血清，有的品牌的血清在使用之前是需要灭活处理的。
2、细胞不贴壁原因比较多，比如使用的培养瓶质量不过关；比如细胞被污染（支原体等）；比如营养成分比例不合适；比如刚刚从冰冻 ...

有没有可能是消化时间过了？

12楼2010-01-25 21:29:26

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cavafory

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Originally posted by mayuan8789 at 2010-01-25 21:17:58:
将细胞瓶倒立放置对贴壁细胞肯定不行了，一般细胞比较顽强的，看似不行还是要好好对待，说不定状态会慢慢好起来。
我们一般用进口太牛血清，细胞长的很不错，血清也很重要的

我传代之后有事就走了，所以后面是让我一个师姐帮我照看，她一看漂着就给我拿出来了，因为是新手，实验室老师让我用实验室剩下的一瓶国产新生牛血清养，其他人用的都是进口的

13楼2010-01-25 21:31:52

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ideal9268

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外来的细胞可能一下子适应不了你这里的培养环境，所以不易活，尽量和原来的培养环境相同吧

14楼2010-01-25 22:12:26

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午夜笛声

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给你建议：如果有贴壁的，换一下培养基，继续培养，应该能长好的！别着急！

春风大雅能容物，秋水文章不染尘

15楼2010-01-25 22:22:39

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fwks3518

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Originally posted by cavafory at 2010-01-25 12:51:23:
本新虫刚开始养细胞，养的第一个细胞是大家说的很好养的Hela，由于本实验室没有，所以找别的实验室要了，有两个途径的来源，但是都长得不好

1、找别的实验室师姐传了一瓶给我，刚拿来的时候那个漂亮，可是传了 ...

如果养了一个星期还没有长满，观察一下培养液的状态。DMEM一般有酚红作为酸碱指示剂，颜色偏黄表示偏酸，颜色偏紫表示偏碱。正常颜色应该是比较清亮的红色（带一点点的橙红），如果养了一个星期了还没长满，培养液不知道是否变浑浊或者ph发生了改变，可以不用消化，直接倒掉旧培养基，换上新培养液即可。

16楼2010-01-25 22:43:25

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fwks3518

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Originally posted by cavafory at 2010-01-25 21:29:26:

有没有可能是消化时间过了？

基本上没有可能。对hela而言，胰酶不会有那么大的损害的。

17楼2010-01-25 22:44:37

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cavafory

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Originally posted by 午夜笛声 at 2010-01-25 22:22:39:
给你建议：如果有贴壁的，换一下培养基，继续培养，应该能长好的！别着急！

我从新复苏了一管，状态还好
另外我把小皿消化了一下，从新加入培养基，发现状态不错，细胞大小也正常

18楼2010-01-26 09:58:38

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liyangmiscap

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我觉得新复苏的那一瓶细胞可以消化后重新加入新的培养基，既可以除去一些死的或是状态不好的细胞，也便于细胞的均匀生长。不过最好注意一下消化时间，把握好尺度

愿与你携手，沿河看柳

19楼2010-01-26 19:04:57

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cavafory

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Originally posted by liyangmiscap at 2010-01-26 19:04:57:
我觉得新复苏的那一瓶细胞可以消化后重新加入新的培养基，既可以除去一些死的或是状态不好的细胞，也便于细胞的均匀生长。不过最好注意一下消化时间，把握好尺度

新复苏的细胞长得很好，今天已经换过液，看明天怎么样