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汕头大学海洋科学接受调剂
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cavafory

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】我的Hela莫名的死了,请赐教

本新虫刚开始养细胞,养的第一个细胞是大家说的很好养的Hela,由于本实验室没有,所以找别的实验室要了,有两个途径的来源,但是都长得不好

1、找别的实验室师姐传了一瓶给我,刚拿来的时候那个漂亮,可是传了两代以后细胞就不贴了,漂浮着死了,因为是星期五传的,周末都不在实验室,拜托师姐换液,师姐说周六就漂着了所以就拿出了培养箱,具体情况我不是很清楚。今天早上我把培养瓶放到显微镜下观察了一下,发现是很多的漂在上面,但是下面有比较大的细胞近乎圆形贴在瓶上,我在想是不是当时本来有贴着的只是少,所以把培养瓶拿出来直立的放着是不是是本来贴的细胞没有了培养基而死了

2、找另外一个实验室要的细胞是冻存细胞,复苏以后用的是小的细胞培养皿(加2ml培养基就可以了)养,已经有一个星期了还没有传过一次代,细胞状态也不好,刚开始的时候有很多种形状,今早看的时候有点奇怪的是细胞在一片区域内好像分裂比较旺盛(一团细胞成圆形),很挤的感觉,但是板子没有铺满,还有很多地方时空的,我想把它消化一下重新培养不知道可不可以

注:我用的培养基是进口瓶装的DMEM,血清是国产的新生牛血清
?:第二种来源的细胞,他们说他们用的是1640培养基,我很疑惑

请高手赐教!!!!!
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cavafory

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by mayuan8789 at 2010-01-25 21:17:58:
将细胞瓶倒立放置对贴壁细胞肯定不行了,一般细胞比较顽强的,看似不行还是要好好对待,说不定状态会慢慢好起来。
我们一般用进口太牛血清,细胞长的很不错,血清也很重要的

我传代之后有事就走了,所以后面是让我一个师姐帮我照看,她一看漂着就给我拿出来了,因为是新手,实验室老师让我用实验室剩下的一瓶国产新生牛血清养,其他人用的都是进口的
13楼2010-01-25 21:31:52
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李彦辉

铜虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
司马诸葛(金币+2): 1-25 16:18
培养基酸碱度,双抗,培养箱的二氧化碳含量,周边环境细胞状态是否有污染都是考虑因素
3楼2010-01-25 14:48:53
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cavafory

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by bigbangrex at 2010-01-25 14:45:51:
1640的就可以了

我用的DMEM 不可以吗?1640不是适合悬浮细胞的吗?
4楼2010-01-25 15:16:50
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cavafory

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 李彦辉 at 2010-01-25 14:48:53:
培养基酸碱度,双抗,培养箱的二氧化碳含量,周边环境细胞状态是否有污染都是考虑因素

培养基是进口的,二氧化碳5%,我的细胞本就没有污染,拿出来放了两天还没有污染,别人的细胞也没有污染,不是污染问题
我没有加双抗
5楼2010-01-25 15:20:45
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