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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】我的Hela莫名的死了，请赐教
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cavafory

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】我的Hela莫名的死了，请赐教

本新虫刚开始养细胞，养的第一个细胞是大家说的很好养的Hela，由于本实验室没有，所以找别的实验室要了，有两个途径的来源，但是都长得不好

1、找别的实验室师姐传了一瓶给我，刚拿来的时候那个漂亮，可是传了两代以后细胞就不贴了，漂浮着死了，因为是星期五传的，周末都不在实验室，拜托师姐换液，师姐说周六就漂着了所以就拿出了培养箱，具体情况我不是很清楚。今天早上我把培养瓶放到显微镜下观察了一下，发现是很多的漂在上面，但是下面有比较大的细胞近乎圆形贴在瓶上，我在想是不是当时本来有贴着的只是少，所以把培养瓶拿出来直立的放着是不是是本来贴的细胞没有了培养基而死了

2、找另外一个实验室要的细胞是冻存细胞，复苏以后用的是小的细胞培养皿（加2ml培养基就可以了）养，已经有一个星期了还没有传过一次代，细胞状态也不好，刚开始的时候有很多种形状，今早看的时候有点奇怪的是细胞在一片区域内好像分裂比较旺盛（一团细胞成圆形），很挤的感觉，但是板子没有铺满，还有很多地方时空的，我想把它消化一下重新培养不知道可不可以

注：我用的培养基是进口瓶装的DMEM，血清是国产的新生牛血清
？：第二种来源的细胞，他们说他们用的是1640培养基，我很疑惑

请高手赐教！！！！！
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1楼 2010-01-25 12:51:23
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bigbangrex

铁杆木虫 (小有名气)
★
amisking(金币+1): 1-25 19:36
1640的就可以了
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2楼2010-01-25 14:45:51
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李彦辉

铜虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
司马诸葛(金币+2): 1-25 16:18
培养基酸碱度，双抗，培养箱的二氧化碳含量，周边环境细胞状态是否有污染都是考虑因素
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3楼2010-01-25 14:48:53
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cavafory

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by bigbangrex at 2010-01-25 14:45:51:
1640的就可以了

我用的DMEM 不可以吗？1640不是适合悬浮细胞的吗？
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4楼2010-01-25 15:16:50
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cavafory

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 李彦辉 at 2010-01-25 14:48:53:
培养基酸碱度，双抗，培养箱的二氧化碳含量，周边环境细胞状态是否有污染都是考虑因素

培养基是进口的，二氧化碳5%，我的细胞本就没有污染，拿出来放了两天还没有污染，别人的细胞也没有污染，不是污染问题
我没有加双抗
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5楼2010-01-25 15:20:45
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李彦辉

铜虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
血清是国产的吗？培养细胞没有特殊说明的话都要加双抗的。特别是国产的血清情况下
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6楼2010-01-25 16:31:41
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wufengjian

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
hela的指定培养基就是1640吧？
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7楼2010-01-25 16:49:02
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cavafory

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by wufengjian at 2010-01-25 16:49:02:
hela的指定培养基就是1640吧？

我在现代生物技术译丛《细胞实验指南》D.L.斯佩克特，R.D.戈德曼 上看到，Hela是用MEM培养基
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8楼2010-01-25 17:05:21
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cavafory

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 李彦辉 at 2010-01-25 16:31:41:
血清是国产的吗？培养细胞没有特殊说明的话都要加双抗的。特别是国产的血清情况下

为什么一定要加双抗呢，我的细胞没有污染，而且我同时用的相同的培养基培养的另两个小皿都没有污染的
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9楼2010-01-25 17:08:58
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fwks

铁杆木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1、不知道你用的哪个牌子的国产血清，有的品牌的血清在使用之前是需要灭活处理的。
2、细胞不贴壁原因比较多，比如使用的培养瓶质量不过关；比如细胞被污染（支原体等）；比如营养成分比例不合适；比如刚刚从冰冻状态活化过来……但总体而言，hela细胞是很好养的
3、培养hela细胞使用DMEM和1640都可以，还是那句话，hela细胞很皮实，这几种培养基在hela细胞培养的文献里都有
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10楼2010-01-25 19:19:10
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