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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】没有内含子的序列怎么DNA和RNA不一致？
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wyandck

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】没有内含子的序列怎么DNA和RNA不一致？

各位虫友帮帮忙吧！我用一对特异引物先对DNA扩增了一段序列，后来为了看它有没有内含子，就对cDNA扩增了一下，结果测序结果回来后发现长度没有变（500bp），其中只有7个碱基和DNA的有差异。有人说用cDNA扩的可能是DNA扩的另外一个等位基因，我觉得不是，如果这样解释的话，那应该测出来2条序列，一条是原来的，一条是新的吧！我认为是不是测序仪的误差呀，我看了测序信号，不强也不弱，哈哈！各位有谁遇到相似的情况，解释以下，谢谢了！
顺便说一下，DNA扩增测序前，我连了质粒，后来用cDNA测我就直接送PCR产物测得。
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1楼 2010-01-24 11:14:40
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smallcat227

木虫 (著名写手)
★
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呵呵，可能就是测序误差吧，不过错误率也太高了点……
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2楼2010-01-24 14:52:49
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
PCR错配也是可能的，所以使用高保真酶试试
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3楼2010-01-24 15:46:53
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
是不是酶的保真性不好啊？
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4楼2010-01-24 21:41:44
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jasco

木虫 (正式写手)
首先保证提取DNA和 RNA的是完全相同的样本
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5楼2010-01-25 15:47:51
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虫子火箭兵

金虫 (正式写手)
测序是有错误的，多测几个克隆比对一下
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6楼2010-01-28 11:25:49
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zjwang

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
等待楼主下文，查出原因。因为很多基因如果没有内含子就直接以DNA为模板扩增了，如果存在你说的问题，那我的实验还真麻烦。不过理论上这样不太可能阿！
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7楼2010-01-28 14:54:35
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