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wyandck

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】没有内含子的序列怎么DNA和RNA不一致?

各位虫友帮帮忙吧!我用一对特异引物先对DNA扩增了一段序列,后来为了看它有没有内含子,就对cDNA扩增了一下,结果测序结果回来后发现长度没有变(500bp),其中只有7个碱基和DNA的有差异。有人说用cDNA扩的可能是DNA扩的另外一个等位基因,我觉得不是,如果这样解释的话,那应该测出来2条序列,一条是原来的,一条是新的吧!我认为是不是测序仪的误差呀,我看了测序信号,不强也不弱,哈哈!各位有谁遇到相似的情况,解释以下,谢谢了!
顺便说一下,DNA扩增测序前,我连了质粒,后来用cDNA测我就直接送PCR产物测得。
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smallcat227

木虫 (著名写手)


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呵呵,可能就是测序误差吧,不过错误率也太高了点……
2楼2010-01-24 14:52:49
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yujiaping1

木虫 (著名写手)


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PCR错配也是可能的,所以使用高保真酶试试
3楼2010-01-24 15:46:53
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
是不是酶的保真性不好啊?
4楼2010-01-24 21:41:44
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jasco

木虫 (正式写手)

首先保证提取DNA和 RNA的是完全相同的样本
5楼2010-01-25 15:47:51
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虫子火箭兵

金虫 (正式写手)

测序是有错误的,多测几个克隆比对一下
6楼2010-01-28 11:25:49
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zjwang

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
等待楼主下文,查出原因。因为很多基因如果没有内含子就直接以DNA为模板扩增了,如果存在你说的问题,那我的实验还真麻烦。不过理论上这样不太可能阿!
7楼2010-01-28 14:54:35
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