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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】重组表达蛋白如何定量
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北极之光

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】重组表达蛋白如何定量

本人做实验中有一个困扰的问题，请各位大侠帮忙解答。
采用真核表达载体表达的一个重组蛋白，具有酶活性。
酶活性的测定可以不受杂蛋白影响，或者说影响不大。但是要做不同种类的重组蛋白的活性对比的时候，需要在同一个浓度下进行，这就需要对目的蛋白进行定量了。
请问：是否一定要对这种目的蛋白进行纯化之后才能进行定量？（由于用亲和吸附材料进行纯化的话有可能会改变蛋白的折叠从而影响活性，所以想问问）
该蛋白在构建载体的时候带了组氨酸标签。

请做过类似研究的同行们不吝赐教，有好的方法多多提醒。！不胜感激！
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人在江湖，谁不三俗！
1楼 2010-01-22 14:08:54
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biogefart

木虫 (著名写手)
组氨酸标签影响酶活的概率很小，严谨的酶学研究必须用纯酶做！！
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闹太套
2楼2010-01-22 14:16:37
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北极之光

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by biogefart at 2010-1-22 14:16:
组氨酸标签影响酶活的概率很小，严谨的酶学研究必须用纯酶做！！

已经测定过细胞培养液的酶活性，很高。即未经纯化之前的活性还是很高的。
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人在江湖，谁不三俗！
3楼2010-01-22 14:39:14
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