| 查看: 790 | 回复: 9 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
jiangkuo0520金虫 (正式写手)
|
[交流]
【求助/交流】PCR 循环设置问题求助,附PCR后电泳图！！！
|
||
|
本人想通过PCR引物延伸的办法，2次延伸在已有序列A后面延伸66BP序列B，引物已由公司合成完毕，现准备进行PCR,但之前没有做过延伸PCR，希望各位虫子出谋划策，不胜感激！ 第一次延伸引物 引物1：5‘TTTGGTACCACCCAGTCTCCAG3’ 引物2：5’TGTCTCTGGCGGTAATATCTGCTCCGGCTCTGGCTGCGGGAGACGGTGACCGT‘3 第二次延伸引物 引物1：5‘TTTGGTACCACCCAGTCTCCAG’3 引物3：5’TTTAAGCTTTCAGCTCCGCCTCCTTCGTCTGCGACTTCTTTGTCTCTGGCGGT‘3 引物1：GC：54.5% TM 51.0°C 22bp 引物2：GC：62.3% TM 69.0°C 53 bp 引物3：GC：52.8°C TM 69.0°C 53bp 先通过引物1，2延伸B中的38Bp，再通过引物1，3延伸B中剩下38bp, 蓝色部分为第一次延伸搭在A序列部分的15bp，红色部分为第二次延伸搭在第一次延伸过后的部分. 请大家帮忙设置下PCR循环及温度！谢谢！ 实验性的设计了一下 95℃ 5min 95℃ 30' 56℃ 30' 72℃ 30' 5CYCLES 95℃ 30' 60℃ 30' 72℃ 30' 10CYCLES 95℃ 30' 65℃ 30' 72℃ 30' 10CYCLES 72℃ 5min 不知道结果如何 正在跑电泳，什么样的结果算是比较理想呢？ 新手跑电泳，跑的不好，大家多提意见 第2到时MARKER DL2000，第3道是PCR产物，可以看到引物二聚体 [ Last edited by jiangkuo0520 on 2010-1-21 at 20:13 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有271人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有3人回复
-
广西民族大学化学化工学院化学工程与技术学硕，材料化工专硕调剂名额充足！
已经有0人回复
jiangkuo0520
金虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 587.2
- 散金: 100
- 帖子: 367
- 在线: 56小时
- 虫号: 872898
- 注册: 2009-10-15
- 专业: 肿瘤免疫
10楼2010-01-21 20:12:02
好复杂啊，只做过普通PCR,
,帮你顶一下，免沉 2楼2010-01-21 15:54:44
jiangkuo0520
金虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 587.2
- 散金: 100
- 帖子: 367
- 在线: 56小时
- 虫号: 872898
- 注册: 2009-10-15
- 专业: 肿瘤免疫
3楼2010-01-21 16:44:00
4楼2010-01-21 16:57:13
20