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【求助】用柱层析分离异黄酮类物质 （急！）
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求助： 用柱层析分离异黄酮类物质 我用30cm的柱子分离异黄酮类物质，那种物质最大吸收波长在270nm，我用的是245nm 检测，因为紫外灯没有270nm，可是我跑了6倍的柱体积都没有检测到，后来我把全部的接液回收，蒸干后有异黄酮的混合物，可能是因为我加样量少了，可是再加大样的浓度的话，样品在乙酸乙酯里就不容了，又不能用甲醇溶，因为甲醇和流动相之一石油醚是不溶的，我想问，怎么才能把这种在270nm的物质检测出来呢， 用245nm的灯点样品，10mMol/L 才会出一个颜色较深的点，那在物质流出来时，能达到10mMol/L吗，怎么计算，跟流速有关系吗 ，各位高手，帮帮我 十分着急啊 ！！！！ |
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9楼2010-01-23 08:39:45
67658795
木虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
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karl2100(金币+1,VIP+0):多谢指教！ 1-21 11:51
luoye2008(金币+7): 1-23 08:40
karl2100(金币+1,VIP+0):多谢指教！ 1-21 11:51
luoye2008(金币+7): 1-23 08:40
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你说的不清楚，首先你的柱材料用的是什么？是硅胶，聚酰胺，还是SephadexL H-20？我用硅胶柱分过，样品混合物点板子有4个黄酮，拿吡啶溶解的上样，流动相是氯仿-甲醇，最后全分到了，其中有一个就是异黄酮。我觉得这和吸收波长没多大关系，只是你的洗脱系统没选好，如果你选的哪个系统合适的话，你要的东西在柱子里的保留时间是不一样的。因为后来用制备液相分，同样条件，HPLC扫描后4个黄酮波长从254-290不等，但保留时间不同，可还是全部拿到了。 PS：我的经验，黄酮大多数溶解性不好，要快快过柱子，不然好多都凝固到柱子材料里面洗不出来了。 |
2楼2010-01-21 10:04:53
3楼2010-01-21 11:04:48
rainbowseer
铁虫 (著名写手)
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4楼2010-01-21 11:38:51