24小时热门版块排行榜    

查看: 624  |  回复: 9
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

luoye2008

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助】用柱层析分离异黄酮类物质 (急!)

求助: 用柱层析分离异黄酮类物质
我用30cm的柱子分离异黄酮类物质,那种物质最大吸收波长在270nm,我用的是245nm 检测,因为紫外灯没有270nm,可是我跑了6倍的柱体积都没有检测到,后来我把全部的接液回收,蒸干后有异黄酮的混合物,可能是因为我加样量少了,可是再加大样的浓度的话,样品在乙酸乙酯里就不容了,又不能用甲醇溶,因为甲醇和流动相之一石油醚是不溶的,我想问,怎么才能把这种在270nm的物质检测出来呢, 用245nm的灯点样品,10mMol/L 才会出一个颜色较深的点,那在物质流出来时,能达到10mMol/L吗,怎么计算,跟流速有关系吗 ,各位高手,帮帮我 十分着急啊  !!!!
回复此楼

» 猜你喜欢

努力奋斗!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rainbowseer

铁虫 (著名写手)


luoye2008(金币+1): 1-23 08:40
至于检测,你可以选择HPLC啊,取少量液体,用甲醇
5楼2010-01-21 11:40:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

67658795

木虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
karl2100(金币+1,VIP+0):多谢指教! 1-21 11:51
luoye2008(金币+7): 1-23 08:40
你说的不清楚,首先你的柱材料用的是什么?是硅胶,聚酰胺,还是SephadexL H-20?我用硅胶柱分过,样品混合物点板子有4个黄酮,拿吡啶溶解的上样,流动相是氯仿-甲醇,最后全分到了,其中有一个就是异黄酮。我觉得这和吸收波长没多大关系,只是你的洗脱系统没选好,如果你选的哪个系统合适的话,你要的东西在柱子里的保留时间是不一样的。因为后来用制备液相分,同样条件,HPLC扫描后4个黄酮波长从254-290不等,但保留时间不同,可还是全部拿到了。
PS:我的经验,黄酮大多数溶解性不好,要快快过柱子,不然好多都凝固到柱子材料里面洗不出来了。
2楼2010-01-21 10:04:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luoye2008

金虫 (小有名气)

先谢谢你了  我用的是硅胶 流动相是乙酸乙酯和石油醚  用乙酸乙酯溶解的样品 我是觉得如果加样量小的话 用紫外灯检测 不久看不出点来了吗  就没有办法接样了 用吡啶 会不会造成样品太粘  不容易洗脱出来  谢谢
努力奋斗!
3楼2010-01-21 11:04:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rainbowseer

铁虫 (著名写手)


luoye2008(金币+1): 1-23 08:40
不会拌样吗?用甲醇溶
4楼2010-01-21 11:38:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
信息提示
请填处理意见