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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求教DNA测序技术鉴定细菌种类
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jessenju

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】求教DNA测序技术鉴定细菌种类

求教DNA测序技术,主要包括以下几个步骤吗
1) 细菌DNA提取,PCR扩增,跑胶分离,DNA测序和基因库对比吗?
2)请问整个过程要在Biosafety Level 2的实验室进行吗,还是普通实验室就可以,能介绍下主要的器材吗?
3)DNA测序是送到公司去做的,那送过去的样品应该是什么形式的,跑完胶之后怎么处理样品;
4)DNA测序后拿到的结果是什么样子的,基因库从哪儿找阿;
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1楼 2010-01-20 11:06:12
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jasco

木虫 (正式写手)
16s rDNA菌种鉴定，通用引物pcr，产物测序即可，普通分子生物学实验室就行了
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4楼2010-02-02 14:33:13
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yuanbo934

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
jessenju(金币+2,VIP+0):谢谢,我没有做过这个实验,能问问这个实验成功率怎么样?有什么关键步骤 要注意的吗? 1-20 12:29
1949stone(金币+2,VIP+0): 1-20 15:40
1) 扩16S后,测完序后在NCBI比对
2)普通实验室就可以,需要超净台,离心机,水浴锅,PCR仪，凝胶成像系统，电泳仪等
3)有两种形式，一割胶直接测序即PCR产物，二把割胶后连接转化进入大肠杆菌中测序
4)拿到的是核算序列，然后在NCBI中的BLAST中比对。
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2楼2010-01-20 11:35:02
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yuanbo934

至尊木虫 (著名写手)
很传统,注意PCR时要有阴性和阳性对照,阴性用配溶液的水.(即提DNA回溶的水,不用TE回溶因为用水PCR更容易做出来),模板DNA可以稀释到一定浓度作PCR.
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3楼2010-02-02 14:17:21
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85715623

木虫 (正式写手)
jessenju(金币+2): 2010-02-02 15:41
《分子克隆试验指南》上有详细介绍，请参考。
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5楼2010-02-02 15:08:42
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