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ln

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】用Quagen Oligotex试剂盒分离mRNA

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大家好!

我买了Clontech的SSH Kit,需先分离纯化mRNA,因此买了Quagen的Oligotex mRNA Spin_Column isolation Mini Kit,今天做了一次,用247ug总RNA分离纯化得到了0.013ug/ul的mRNA,浓度太低了,不符合SSH Kit试验要求,哪位高手能支支招啊,是否有浓缩的方法或是操作时候需要注意什么啊,先谢谢了!
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sshssh

新虫 (初入文坛)

你的总RNA量太少,至少需要600ug。这是我的经验
好好努力
4楼2011-08-27 19:28:19
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wwyy0818

新虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你最后把mRNA洗下来的时候少加点洗脱buffer.........
2楼2010-01-20 08:44:46
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ln

新虫 (初入文坛)

谢谢回复!

说明书上洗脱buffer的用量是20-100ul,我加了20ul,而且上面要求加入buffer以后吹吸混匀,但20ul加进去后都被column上的膜吸附了,没法吹吸,我的mRNA回收率低是不是跟没吹吸有关啊?

此外,今天重新分析的时候发现当时我第一步出了错误,RNase-free water多加了70ul,还有就是整个操作过程中离心温度没达到20-30度,有些buffer需要37或70°孵育,我做了,但是离心管的没预热所以温度达不到,是不是整个过程中对温度要求也很高呢?

请大家多多帮忙啊,我很着急。
3楼2010-01-20 15:52:14
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