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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】用Quagen Oligotex试剂盒分离mRNA
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ln

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】用Quagen Oligotex试剂盒分离mRNA

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大家好！

我买了Clontech的SSH Kit，需先分离纯化mRNA，因此买了Quagen的Oligotex mRNA Spin_Column isolation Mini Kit，今天做了一次，用247ug总RNA分离纯化得到了0.013ug/ul的mRNA，浓度太低了，不符合SSH Kit试验要求，哪位高手能支支招啊，是否有浓缩的方法或是操作时候需要注意什么啊，先谢谢了！
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1楼 2010-01-19 20:19:59
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ln

新虫 (初入文坛)
谢谢回复！

说明书上洗脱buffer的用量是20-100ul，我加了20ul，而且上面要求加入buffer以后吹吸混匀，但20ul加进去后都被column上的膜吸附了，没法吹吸，我的mRNA回收率低是不是跟没吹吸有关啊？

此外，今天重新分析的时候发现当时我第一步出了错误，RNase-free water多加了70ul，还有就是整个操作过程中离心温度没达到20-30度，有些buffer需要37或70°孵育，我做了，但是离心管的没预热所以温度达不到，是不是整个过程中对温度要求也很高呢？

请大家多多帮忙啊，我很着急。
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3楼2010-01-20 15:52:14
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wwyy0818

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你最后把mRNA洗下来的时候少加点洗脱buffer.........
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2楼2010-01-20 08:44:46
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sshssh

新虫 (初入文坛)
你的总RNA量太少，至少需要600ug。这是我的经验
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好好努力
4楼2011-08-27 19:28:19
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