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main128

木虫 (正式写手)

[交流] 【讨论】关于多糖的分离问题

我希望分离出不同分子量大小的直链均一多糖,我目前使用的方法是sephadex葡聚糖凝胶分离,但是发现分不开,除了选用的凝胶不合适外还有其他的原因吗?

再请教各位,直链的均一多糖还可以用哪些方法分离?
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lai.scut

铜虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★
hawkyin(金币+1,VIP+0):谢谢回帖交流! 1-18 20:54
main128(金币+5,VIP+0): 1-18 21:23
除了凝胶的选择问题,还有可能是洗脱速度的问题,如果太快了,也可能分不开
其他方法的话,膜分离可以试试
2楼2010-01-18 19:27:19
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main128

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by lai.scut at 2010-1-18 19:27:
除了凝胶的选择问题,还有可能是洗脱速度的问题,如果太快了,也可能分不开
其他方法的话,膜分离可以试试

再请问流速一般设为多大呢?
3楼2010-01-18 21:25:01
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yaodeyaode

木虫 (职业作家)

★ ★ ★ ★ ★
main128(金币+5,VIP+0): 1-19 01:38
引用回帖:
Originally posted by main128 at 2010-1-18 19:05:
我希望分离出不同分子量大小的直链均一多糖,我目前使用的方法是sephadex葡聚糖凝胶分离,但是发现分不开,除了选用的凝胶不合适外还有其他的原因吗?

再请教各位,直链的均一多糖还可以用哪些方法分离?

————————————————
先用DEAE柱分离,洗脱液应用H2O、0.05、0.10、0.20、0.5 mol/L 的NaCl 溶液进行梯度洗脱;然后未分开的组份再用Superdex  凝胶柱,用0.10 M NaCl 溶液进行分离,效果较好
4楼2010-01-18 22:02:53
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superharry

至尊木虫 (职业作家)


main128(金币+1,VIP+0): 1-19 01:40
好好调节一下试验参数  多做几次 确定硬件设备良好
5楼2010-01-18 23:27:32
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main128

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by yaodeyaode at 2010-1-18 22:02:


————————————————
先用DEAE柱分离,洗脱液应用H2O、0.05、0.10、0.20、0.5 mol/L 的NaCl 溶液进行梯度洗脱;然后未分开的组份再用Superdex  凝胶柱,用0.10 M NaCl 溶液进行分离,效果较好

但又有一个疑问,检测器改选那种?
我选了示差折光检测器,不能用梯度的。
6楼2010-01-19 01:40:15
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天冬酰胺

至尊木虫 (著名写手)

★ ★
main128(金币+2,VIP+0): 1-19 16:12
DEAE分离,水洗脱,分部收集器收集,每管或隔管测糖含量,收集主峰,然后再上HPLC检测纯度;NaCl洗脱,可直接上梯度,同法测定糖含量,收集单一主峰,HPLC测纯度
7楼2010-01-19 02:10:04
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天冬酰胺

至尊木虫 (著名写手)


main128(金币+1,VIP+0): 1-19 16:21
或者可以用超滤,选择不同截留分子量大小的膜进行分离,可获得大概分子量范围的多糖,但是一般超滤的损失大,需要的周期长,超滤循环次数较多才能达到纯度较高的多糖
8楼2010-01-19 02:11:36
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yaodeyaode

木虫 (职业作家)

★ ★ ★ ★ ★
main128(金币+5,VIP+0): 1-19 14:53
引用回帖:
Originally posted by main128 at 2010-1-19 01:40:



但又有一个疑问,检测器改选那种?
我选了示差折光检测器,不能用梯度的。

在初步分离时,不用检测器(示差折光检测器都不用),直接按我建议的分离,然后用分部收集器收集,再对每管用苯酚-硫酸法测多糖含量(上样前必须透析,除小分子,并脱蛋白),收集主要的组份,然后再上HPLC检测纯度。

其实有这样很多的文献,去中国期刊网下载一些类似的文章或硕博士论文,其中有详细的方法。
9楼2010-01-19 07:12:51
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main128

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 天冬酰胺 at 2010-1-19 02:10:
DEAE分离,水洗脱,分部收集器收集,每管或隔管测糖含量,收集主峰,然后再上HPLC检测纯度;NaCl洗脱,可直接上梯度,同法测定糖含量,收集单一主峰,HPLC测纯度

梯度怎么上?我这只有横流泵,呵呵,不好意思,问了个弱弱的问题。
10楼2010-01-19 16:14:15
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