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wmy712100

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】请教质粒PCR跑不出目的条带的原因

我的试验是:链接转化后,进行蓝白斑筛选,挑取单菌进行菌落PCR后电泳检测得到我的目的条带为1014bp,然后摇菌,使用天根的质粒小提试剂盒提取质粒后,将质粒稀释100倍,取1ul进行质粒PCR,PCR的条件和菌落PCR条件一样,都进行40个循环,结果却只在100bp有一条带,却没有我的目的条带。
请各位高手帮忙分析一下原因。谢谢。
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沙中清泉

木虫 (正式写手)

★ ★
wmy712100(金币+2):谢谢参与
1949stone(金币+1,VIP+0): 1-16 10:56
有可能你就没连上T载,做个阳性对照看看
6楼2010-01-16 10:32:49
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

★ ★
wmy712100(金币+2):谢谢参与
1949stone(金币+1,VIP+0): 1-16 10:56
已经质粒回收了,建议酶切检测,比PCR简单,还可靠
2楼2010-01-15 22:12:23
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wmy712100

铁虫 (初入文坛)

谢谢。我也想做酶切,可老板不舍得花钱买酶,只让做PCR,所以必须PCR做出来,才让送出去测序。
3楼2010-01-15 22:19:02
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pengl001

木虫 (小有名气)

★ ★
wmy712100(金币+2):谢谢参与
1949stone(金币+1,VIP+0): 1-16 10:56
I come croos the same problem,and I want to use enzyme but my boss care a lot for money,I have to do PCR over again and again
Yes,Ican!
4楼2010-01-16 00:48:11
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