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jinlicong

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】微生物生长条件优化方面问题

液体培养基培养微生物菌种,想通过改变PH值、摇床转速、接种量等方式确定一个最佳培养条件。
目前发现摇床转速(100 120 140 160 180 200 220)越高,所测菌种OD值曲线也越高,都没见个平缓趋势。这样实在不知道该如何选取转速
而接种量上(1% 5% 10% 15% 20% 25%),都已经做到25%了,24小时培养后测定的OD值也是一直往上升……貌似没有尽头的样子。
我看一些人的研究,都会有个范围(先升,然后平缓,最后开始降),我这个都找不到范围了……所以不知该如何确定
希望得到相关经验的朋友的指导,谢谢!

另外就是测OD值的问题,我发现误差还是挺大的~~~不晓得你们在做某个参数对菌种生长影响的时候是用什么方式论定的?

[ Last edited by jinlicong on 2010-1-15 at 15:38 ]
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guanni1011

铁虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
OD值到达一定的时候只是趋于平缓(不稀释),你是看哪些人的研究说会降低???你做个生长曲线就知道了,OD值是测菌体的浓度,通过吸光度判断,菌体的数量只会是越来越多,如果按照你说的OD降低,那等于说菌体减少了,那菌体会消失到哪里去了呢。不要稀释测定OD,这样你掌握不了菌的生长情况,菌体的生长曲线会很清楚的表示在开始一段时间,OD是缓慢上升,然后到一定的时候进入生长期,OD值快速增长,接着OD趋于平缓。
你做这个实验的目的是什么?如果单纯从培养菌的角度来说,我觉得没有必要进行此类研究,转速200左右,接种量1%,PH用别人做过的最适PH就行了。转速高,长得快,转速低,长得慢,我们一般接种是放在下午,然后过夜摇一晚上,所以你计算计算自己第二天能够何时开始做实验,就用什么样的转速。接种量的话不要超过5%,1%够了,太多的话影响整个培养基的体积,所以你做接种量的实验非常浪费时间,因为培养体积相差很大,怎么进行横向比较呢?如果你是做发酵实验,对PH值,培养温度等一些参数进行正交实验,来判断发酵的最佳条件
10楼2010-02-04 10:52:31
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

★ ★
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司马诸葛(金币+1,VIP+0): 1-15 19:25
一般来说都是固定转速,固定的接种量,然后随着时间不同做OD值的测定的啊~
不知道楼主做的是什么东东?
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2010-01-15 15:47:32
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xiaowangv1

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
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司马诸葛(金币+2,VIP+0): 1-15 19:25
做发酵条件优化要先大范围优化再小范围优化。比如转速可以先做100,200,300,400.......(必须查文献根据菌的情况定),再从小范围内优化。
OD值检测最好用一台机器、一个人做、范围稀释到OD值在0.2-0.8为宜,必须做发酵培养基为空白对照。
以上建议仅供参考,希望对你有些帮助。
3楼2010-01-15 15:55:35
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guoenwen

金虫 (小有名气)

★ ★
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司马诸葛(金币+1,VIP+0): 1-15 19:25
我们培养大肠杆菌,摇床转速是180rpm/min,三角瓶是2L,装800ml LB培养基。接种量在0.5%-1%,发酵接种量5%-10%.培养温度是37℃。
4楼2010-01-15 16:08:10
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jinlicong

新虫 (初入文坛)

恩,我大概知道我的失误之处在哪了……
谢谢楼上各位虫友
5楼2010-01-15 17:22:10
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小多余

铜虫 (小有名气)

建议测菌浓,
6楼2010-01-20 20:48:10
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ljj0327

铁虫 (小有名气)


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你测OD得时候是否稀释发酵液了呢?如果不稀释误差会很大!而且放到你所检测的分管光度计里之后要马上测,否则菌体会沉淀,影响读数!
7楼2010-02-03 11:41:32
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tjkdcl

铁杆木虫 (著名写手)

OD值应当稀释到02.-0.8之间,否则误差会很大
有志者事竟成!
8楼2010-02-03 14:20:40
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85715623

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
只做单因素的试验当然容易一路上升,试想转速、接种量当然是越大越好,但会接近一个极限。还要结合其他因素的限制找到影响因素的最优组合。
9楼2010-02-03 14:32:42
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