24小时热门版块排行榜    

查看: 748  |  回复: 5
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zhaiyi897

金虫 (小有名气)

[交流] 基因文库构建

大家好,现在本人在准备构建一细菌的基因组文库。但以前没这方面的知识,所以在此请做过这方面研究的虫友指点。先行多谢了。
问题:开始的小量酶切如何做?小量酶切体系确定好后,如何放大体系?
         文库构建需要多少量的DNA和酶进行酶切?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaiyi897

金虫 (小有名气)

基因文库构建

我构建的是部分文库,所需要的目的片段为2-8kb。,用的是sau31,就用一般的载体。关键是分离到2-8kb片段后,如何先做小量DNA的酶切试验,然后在做大量DNA的酶切体系。
多谢两位了
4楼2010-01-15 16:52:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1,VIP+0): 1-15 15:42
请说明你是要构建质粒文库还是粘粒文库,或是大片段的BAC文库。

酶切时选用的是什么酶。四碱基识别位点的还是6碱基识别位点的。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2010-01-15 14:04:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gn2003_0

金虫 (小有名气)

你说的太笼统,如楼上所提,详细下
3楼2010-01-15 16:09:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zemin_fang

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
先用1ug左右基因组酶切,酶5U,做时间梯度2.4.6.8.10min等用EDTA终止反应,跑电泳检测在2-8kb条带。回收就OK,如果片段太小,就减小酶量。
5楼2010-01-15 16:56:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +3 启萌科技 2026-08-12 11/550 2026-08-13 22:57 by 启萌科技
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +9 Tide man 2026-08-10 10/500 2026-08-13 20:33 by 温淼淼淼
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 28/1400 2026-08-13 17:51 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +14 documentary 2026-08-10 16/800 2026-08-13 16:39 by 润生71
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 好奇怪的filecode +5 布布和一二 2026-08-08 6/300 2026-08-12 16:11 by 云上清扬
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 10/500 2026-08-12 09:12 by 布布和一二
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[硕博家园] 读博的好处 +3 lnee 2026-08-11 3/150 2026-08-11 18:10 by 希望我好好的
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
信息提示
请填处理意见