应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 基因文库构建
61/1返回列表
查看: 652  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

zhaiyi897

金虫 (小有名气)

[交流] 基因文库构建

大家好，现在本人在准备构建一细菌的基因组文库。但以前没这方面的知识，所以在此请做过这方面研究的虫友指点。先行多谢了。
问题：开始的小量酶切如何做？小量酶切体系确定好后，如何放大体系？
         文库构建需要多少量的DNA和酶进行酶切？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2010-01-15 10:25:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1,VIP+0): 1-15 15:42
请说明你是要构建质粒文库还是粘粒文库，或是大片段的BAC文库。

酶切时选用的是什么酶。四碱基识别位点的还是6碱基识别位点的。
赞一下(11人) 回复此楼
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2010-01-15 14:04:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gn2003_0

金虫 (小有名气)
你说的太笼统，如楼上所提，详细下
赞一下 回复此楼
3楼2010-01-15 16:09:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaiyi897

金虫 (小有名气)

基因文库构建

我构建的是部分文库，所需要的目的片段为2-8kb。，用的是sau31，就用一般的载体。关键是分离到2-8kb片段后，如何先做小量DNA的酶切试验，然后在做大量DNA的酶切体系。
多谢两位了
赞一下 回复此楼
4楼2010-01-15 16:52:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zemin_fang

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
先用1ug左右基因组酶切，酶5U，做时间梯度2.4.6.8.10min等用EDTA终止反应，跑电泳检测在2-8kb条带。回收就OK,如果片段太小，就减小酶量。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2010-01-15 16:56:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaiyi897

金虫 (小有名气)
那用多大的反应体系？小量酶切体系确定了，那么大量切的时候体系如何放大呢？
赞一下 回复此楼
6楼2010-01-15 20:11:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zhaiyi897 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿新疆大学085401，314分 +4 咔咔咔咔9 2026-04-05 4/200 2026-04-12 02:21 by 秋豆菜芽
[考研] 316求调剂 +5 想读研究生( ?∵ 2026-04-07 5/250 2026-04-12 00:43 by 蓝云思雨
[考研] 0860004 求调剂 309分 +9 Yin DY 2026-04-08 9/450 2026-04-11 22:55 by dongdian1
[考研] 调剂 +6 月@163.com 2026-04-11 6/300 2026-04-11 21:46 by lwk2004
[考研] 343求调剂 +9 王国帅 2026-04-10 9/450 2026-04-11 20:31 by dongdian1
[考研] 270求调剂 +14 杨乐369 2026-04-11 14/700 2026-04-11 20:16 by 蓝云思雨
[考研] 297求调剂 +9 Kwgyz 2026-04-09 9/450 2026-04-11 10:09 by zhq0425
[考研] 284求调剂 +12 archer.. 2026-04-10 13/650 2026-04-11 08:44 by zhq0425
[考研] 265求调剂 +12 风说她早忘了 2026-04-10 13/650 2026-04-10 18:56 by chemisry
[考研] 生物与医药调剂 +5 十七sa 2026-04-05 5/250 2026-04-10 08:14 by kangsm
[考研] 本科211 工科085400 280分求调剂 可跨专业 +3 LZH（等待调剂中 2026-04-09 3/150 2026-04-09 21:29 by wutongshun
[考研] 348求调剂 +3 candyyyi 2026-04-09 3/150 2026-04-09 17:20 by 段伟艳
[考研] 一志愿985初试354分生物调剂 +3 031001 2026-04-06 3/150 2026-04-09 00:30 by Evan_Liu
[考研] 一志愿南京航空航天大学 材料与化工329分求调剂 +11 Mr. Z 2026-04-05 12/600 2026-04-08 16:15 by luoyongfeng
[考研] 281求调剂 +10 椰子蘑菇 2026-04-06 10/500 2026-04-08 11:43 by zzucheup
[考研] 277、学硕，求调剂 数一104， +11 瓶子PZ 2026-04-07 12/600 2026-04-07 23:30 by 一只好果子?
[考研] 一志愿太原理工大学计算机技术专硕348，求调剂指导 +3 nexious 2026-04-05 3/150 2026-04-07 08:19 by jp9609
[考研] 生物与医药求调剂 +7 heguanhua 2026-04-05 8/400 2026-04-06 18:41 by macy2011
[考研] 一志愿河北工业大学材料工程，初试344求专硕调剂 +6 15933906766 2026-04-05 6/300 2026-04-06 13:21 by 无际的草原
[考研] 一志愿北交大材料工程总分358求调剂 +6 cs0106 2026-04-05 6/300 2026-04-05 16:34 by imissbao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭