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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 基因文库构建
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zhaiyi897

金虫 (小有名气)

[交流] 基因文库构建

大家好，现在本人在准备构建一细菌的基因组文库。但以前没这方面的知识，所以在此请做过这方面研究的虫友指点。先行多谢了。
问题：开始的小量酶切如何做？小量酶切体系确定好后，如何放大体系？
         文库构建需要多少量的DNA和酶进行酶切？
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1楼 2010-01-15 10:25:05
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1,VIP+0): 1-15 15:42
请说明你是要构建质粒文库还是粘粒文库，或是大片段的BAC文库。

酶切时选用的是什么酶。四碱基识别位点的还是6碱基识别位点的。
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2010-01-15 14:04:24
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gn2003_0

金虫 (小有名气)
你说的太笼统，如楼上所提，详细下
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3楼2010-01-15 16:09:52
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zhaiyi897

金虫 (小有名气)

基因文库构建

我构建的是部分文库，所需要的目的片段为2-8kb。，用的是sau31，就用一般的载体。关键是分离到2-8kb片段后，如何先做小量DNA的酶切试验，然后在做大量DNA的酶切体系。
多谢两位了
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4楼2010-01-15 16:52:54
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zemin_fang

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
先用1ug左右基因组酶切，酶5U，做时间梯度2.4.6.8.10min等用EDTA终止反应，跑电泳检测在2-8kb条带。回收就OK,如果片段太小，就减小酶量。
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5楼2010-01-15 16:56:54
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zhaiyi897

金虫 (小有名气)
那用多大的反应体系？小量酶切体系确定了，那么大量切的时候体系如何放大呢？
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6楼2010-01-15 20:11:33
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