24小时热门版块排行榜    

查看: 742  |  回复: 5
当前主题已经存档。

zhaiyi897

金虫 (小有名气)

[交流] 基因文库构建

大家好,现在本人在准备构建一细菌的基因组文库。但以前没这方面的知识,所以在此请做过这方面研究的虫友指点。先行多谢了。
问题:开始的小量酶切如何做?小量酶切体系确定好后,如何放大体系?
         文库构建需要多少量的DNA和酶进行酶切?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1,VIP+0): 1-15 15:42
请说明你是要构建质粒文库还是粘粒文库,或是大片段的BAC文库。

酶切时选用的是什么酶。四碱基识别位点的还是6碱基识别位点的。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2010-01-15 14:04:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gn2003_0

金虫 (小有名气)

你说的太笼统,如楼上所提,详细下
3楼2010-01-15 16:09:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaiyi897

金虫 (小有名气)

基因文库构建

我构建的是部分文库,所需要的目的片段为2-8kb。,用的是sau31,就用一般的载体。关键是分离到2-8kb片段后,如何先做小量DNA的酶切试验,然后在做大量DNA的酶切体系。
多谢两位了
4楼2010-01-15 16:52:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zemin_fang

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
先用1ug左右基因组酶切,酶5U,做时间梯度2.4.6.8.10min等用EDTA终止反应,跑电泳检测在2-8kb条带。回收就OK,如果片段太小,就减小酶量。
5楼2010-01-15 16:56:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaiyi897

金虫 (小有名气)

那用多大的反应体系?小量酶切体系确定了,那么大量切的时候体系如何放大呢?
6楼2010-01-15 20:11:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zhaiyi897 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 11/550 2026-08-13 10:40 by ZH远山
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +9 家与远方 2026-08-10 14/700 2026-08-13 09:41 by 臭臭不臭01
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 36/1800 2026-08-12 22:50 by sdfapple719
[基金申请] 好奇怪的filecode +5 布布和一二 2026-08-08 6/300 2026-08-12 16:11 by 云上清扬
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +4 工厂打螺丝 2026-08-08 4/200 2026-08-12 09:18 by hansi2025
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 10/500 2026-08-12 09:12 by 布布和一二
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +8 Tide man 2026-08-10 9/450 2026-08-11 20:39 by beefly
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[硕博家园] 读博的好处 +3 lnee 2026-08-11 3/150 2026-08-11 18:10 by 希望我好好的
[基金申请] 听说今天filecode变了 +26 布布和一二 2026-08-06 49/2450 2026-08-11 13:18 by WH3796
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 固定端突然变了,今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
信息提示
请填处理意见