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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】请问 C18反相柱能用于培养基组分的测定吗？
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eagle_edu

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】请问 C18反相柱能用于培养基组分的测定吗？

我现在想要测一下以蔗糖为碳源的培养基发酵前后组分的变化，看看生成什么代谢产物，想用高效液相色谱做一下，以前没用过HPLC，实验员说是用C18反相柱，平时测药物的，请教各位，这个色谱柱可以用吗？
关于HPLC的分析软件都用什么？
非常感谢！
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1楼 2010-01-15 09:12:20
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wwyy0818

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by eagle_edu at 2010-1-15 11:27:



谢谢！还有一个问题，就是测样之前培养基应该怎样预处理？例如离心 过滤除菌什么的？

用0.25um的膜过滤，或在12000g下离心20min
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2010-01-15 11:32:37
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wwyy0818

新虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+5,VIP+0): 1-15 11:46
可以使用的。 另外，HPLC的分析软件都是色谱系统自带的，很贵的哦
你要做这个实验，要做三个分析：
1.走一针作为对照的培养基
2.走一针发酵之后的培养基
3.对比两次HPLC的图谱，看看哪个（些）峰显著增高？注意1，2两次实验的上样量要一样而且系统条件要一样。
最后，如果上述比对结果为positive，就只能你自己来确认这个代谢产物是什么了
赞一下(20人) 回复此楼
2楼2010-01-15 11:19:31
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eagle_edu

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by wwyy0818 at 2010-1-15 11:19:
可以使用的。 另外，HPLC的分析软件都是色谱系统自带的，很贵的哦
你要做这个实验，要做三个分析：
1.走一针作为对照的培养基
2.走一针发酵之后的培养基
3.对比两次HPLC的图谱，看看哪个（些）峰显著增高？注 ...

谢谢！还有一个问题，就是测样之前培养基应该怎样预处理？例如离心 过滤除菌什么的？
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3楼2010-01-15 11:27:54
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wwyy0818

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by wwyy0818 at 2010-1-15 11:32:

用0.25um的膜过滤，或在12000g下离心20min

还有，你的样品中不能含有大分子量的蛋白（10KD以上），要不可能会堵塞柱子
赞一下 回复此楼
5楼2010-01-15 11:33:53
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