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木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】大肠杆菌转化问题和质粒问题

目前遇到问题两个：
质粒转化DH5a很好转，转化率很高，但是转BL21很难，有时候好几个板只能有一个菌，不知道是哪里的问题？
还有一个问题：
同一种质粒，从DH5a和BL21提取出来，跑电泳大小不一样，相差很多，酶切后大小一样，原因是什么呢？

1楼 2010-01-14 09:20:37

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木虫 (小有名气)

★
goonhetty(金币+1,VIP+0): 1-15 08:46

你查查这两个菌的详细资料
是跟“质粒不相容性”有关，BL21对这个质粒估计是“水土不服”
还有，要表达蛋白估计是有毒的，造成质粒突变

4楼2010-01-14 21:02:31

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金虫 (小有名气)

★ ★ ★
amisking(金币+2,VIP+0): 1-14 21:02
goonhetty(金币+1,VIP+0): 1-15 08:47

转化效率不一样首先是你的两种感受态制备会不会有差别，BL21 的转化一般还好的，板上有不少单菌落的。提取质粒不同的问题就不熟悉了。

2楼2010-01-14 20:28:28

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木虫 (正式写手)

★ ★ ★
amisking(金币+2,VIP+0): 1-14 21:02
goonhetty(金币+1,VIP+0): 1-15 08:46

你从不同细胞中提取到的质粒，超螺旋的程度可能会不同。跑电泳时，因为质粒的超螺旋程度不同，可能会得到不同的移动速度。所以，没有酶切的质粒，不能凝胶电泳判断。只有酶切出的线性条带才行，而且尽量做双酶切。

3楼2010-01-14 21:01:13

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