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goonhetty

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】大肠杆菌转化问题和质粒问题

目前遇到问题两个:
质粒转化DH5a很好转,转化率很高,但是转BL21很难,有时候好几个板只能有一个菌,不知道是哪里的问题?
还有一个问题:
同一种质粒,从DH5a和BL21提取出来,跑电泳大小不一样,相差很多,酶切后大小一样,原因是什么呢?
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guoenwen

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
amisking(金币+2,VIP+0): 1-14 21:02
goonhetty(金币+1,VIP+0): 1-15 08:47
转化效率不一样首先是你的两种感受态制备会不会有差别,BL21 的转化一般还好的,板上有不少单菌落的。提取质粒不同的问题就不熟悉了。
2楼2010-01-14 20:28:28
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Temin2009

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
amisking(金币+2,VIP+0): 1-14 21:02
goonhetty(金币+1,VIP+0): 1-15 08:46
你从不同细胞中提取到的质粒,超螺旋的程度可能会不同。跑电泳时,因为质粒的超螺旋程度不同,可能会得到不同的移动速度。所以,没有酶切的质粒,不能凝胶电泳判断。只有酶切出的线性条带才行,而且尽量做双酶切。
3楼2010-01-14 21:01:13
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hhwang

木虫 (小有名气)


goonhetty(金币+1,VIP+0): 1-15 08:46
你查查这两个菌的详细资料
是跟“质粒不相容性”有关,BL21对这个质粒估计是“水土不服”
还有,要表达蛋白估计是有毒的,造成质粒突变
4楼2010-01-14 21:02:31
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