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小虫之老虫

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】普通PCR扩不出的菌在定量PCR时扩出来了,怎么解释?

我设计的特异性引物,先做了普通PCR进行了验证,目的菌能扩出来,用来做验证的非目的菌扩不出来,可是上定量了以后非目的菌也都扩出来了,而且熔解曲线跟目的菌的重合,Tm值也很接近,相差正负0.03以内,非目的菌的Ct值也不大,在18~30之间。目的菌的Ct值是14左右。
第一次做定量,很多问题都不懂,请大家帮帮忙!
谢谢!
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小虫之老虫

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 沙中清泉 at 2010-1-12 21:47:
交叉污染了?

应该不是...
首先,所有用来做验证的都扩出来了
然后,我用现在正在使用的DNA测过序,测序结果证明这些菌都是各不相同的
3楼2010-01-12 21:56:49
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zrb7858

至尊木虫 (著名写手)

片风


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
普通PCR应该也扩增除了,可能浓度低,看不到
4楼2010-01-13 08:26:25
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hyde0706

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
实时灵敏度高啊!最低可以检测10个拷贝,普通PCR电泳检测肯定不行了。
5楼2010-01-13 08:27:43
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小虫之老虫

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by zrb7858 at 2010-1-13 08:26:
普通PCR应该也扩增除了,可能浓度低,看不到

哦,我后来也怀疑是不是这样的
那用普通PCR鉴定特异性就没什么意义了吗?
要怎么办呢?
我最终是要上定量的
6楼2010-01-13 11:10:57
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