24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 786  |  回复: 7
当前主题已经存档。

sdspring

金虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】带有酶切位点的引物的退火温度如何计算?



引入酶切位点后的引物,其退火温度以整个引物的Tm值(往往较高)还是除去酶切位点后配对序列的Tm值为准计算?

两者有时差别挺大的。 谢谢!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tianpingpe

新虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
司马诸葛(金币+1,VIP+0): 1-11 15:06
按照去除酶切位点的部分计数,不与模板结合的地方计算tm值时不考虑
2楼2010-01-11 14:10:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
司马诸葛(金币+1,VIP+0): 1-11 15:06
我喜欢用逐步提高退火的方法做~~~往往条带单一
也就是一开始用去掉酶切位点的,后面用几乎是两步法的做
3楼2010-01-11 14:14:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
司马诸葛(金币+1,VIP+0): 1-11 15:06
我也一般首先以去除酶切位点的退火温度做5个循环。然后引物全长退火温度做25个循环
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
4楼2010-01-11 15:00:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiangchou812

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我用PCR克隆过五个片段,均使用2楼的方法。没有问题。但是三四楼的方法应该更好一点!
5楼2010-01-11 16:30:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

沙中清泉

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我一般直接以引物合成单上的Tm值为准,再减五度(赛百盛合成的引物),一般都能P出来
6楼2010-01-11 16:32:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sdspring

金虫 (初入文坛)

谢谢各位!

那么说要根据两种Tm值摸索两种退火温度喽? 好像挺有难度的
7楼2010-01-12 08:30:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sailormoon8623


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
恩,三楼的有道理,一般都是前5轮降5度,这样引物匹配得好
8楼2010-01-12 14:01:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 sdspring 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 电气专硕320求调剂 +5 小麻子111 2026-04-10 5/250 2026-04-12 02:43 by 秋豆菜芽
[考研] 312求调剂 +6 李鸿飞飞 2026-04-06 6/300 2026-04-12 00:34 by 蓝云思雨
[考研] 调剂 +10 只叙离别辞 2026-04-09 12/600 2026-04-11 20:57 by 逆水乘风
[考研] 308求调剂 +3 VvvvL 2026-04-10 3/150 2026-04-11 15:32 by xiangxu
[考研] 0854调剂 +11 长弓傲 2026-04-09 12/600 2026-04-11 11:16 by zhq0425
[考研] 300分求调剂 (085501机械专硕,本科扬大) +8 xu@841019 2026-04-11 8/400 2026-04-11 10:46 by qingpingzhu
[考研] 22408 327分求调剂 +4 韵风kon 2026-04-10 4/200 2026-04-11 09:51 by 猪会飞
[考研] 人工智能320调剂08工类还有机会吗 +11 振—TZ 2026-04-10 11/550 2026-04-10 21:51 by blankyung
[考研] 一志愿华东师范生物学326分,求调剂 +8 刘墨墨 2026-04-09 8/400 2026-04-10 12:00 by pengliang8036
[考研] 一志愿双非085400电子信息344 求调剂,对材料和化学方向也感兴趣 +8 无情的小羊 2026-04-09 9/450 2026-04-10 09:30 by 松花缸1201
[考研] 生物学求调剂 一志愿沪9,326分 +7 刘墨墨 2026-04-06 7/350 2026-04-10 08:11 by kangsm
[考研] 求调剂希望还是希望在山河四省附近 +3 快乐的小白鸽 2026-04-05 3/150 2026-04-09 17:36 by wp06
[考研] 求调剂材料科学与工程一志愿985初试365分 +5 材化李可 2026-04-08 5/250 2026-04-09 17:00 by Lilly_Li
[考研] 材料调剂 +14 一样YWY 2026-04-05 15/750 2026-04-09 13:36 by 故人??
[考研] 材料科学与工程320求调剂,080500 +12 黄瓜味薯片 2026-04-06 12/600 2026-04-08 16:26 by luoyongfeng
[考研] 344求调剂 +11 魏子per 2026-04-07 11/550 2026-04-07 23:01 by JourneyLucky
[考研] 一志愿南科大生物学297分,求调剂推荐 +8 Y-yyusx 2026-04-06 9/450 2026-04-07 19:38 by biomichael
[考研] 085602调剂 初试总分335 +3 19123253302 2026-04-06 3/150 2026-04-07 18:00 by jp9609
[考研] 求助 +3 卡卡东88 2026-04-06 4/200 2026-04-06 15:28 by going home
[考研] 327求调剂 +4 拾光任染 2026-04-05 4/200 2026-04-05 20:16 by 南航~万老师
信息提示
请填处理意见