应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】带有酶切位点的引物的退火温度如何计算？
81/1返回列表
查看: 839  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

sdspring

金虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】带有酶切位点的引物的退火温度如何计算？



引入酶切位点后的引物，其退火温度以整个引物的Tm值（往往较高）还是除去酶切位点后配对序列的Tm值为准计算？

两者有时差别挺大的。 谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2010-01-11 08:45:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tianpingpe

新虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
司马诸葛(金币+1,VIP+0): 1-11 15:06
按照去除酶切位点的部分计数，不与模板结合的地方计算tm值时不考虑
赞一下(11人) 回复此楼
2楼2010-01-11 14:10:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
司马诸葛(金币+1,VIP+0): 1-11 15:06
我喜欢用逐步提高退火的方法做~~~往往条带单一
也就是一开始用去掉酶切位点的，后面用几乎是两步法的做
赞一下(11人) 回复此楼
3楼2010-01-11 14:14:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
司马诸葛(金币+1,VIP+0): 1-11 15:06
我也一般首先以去除酶切位点的退火温度做5个循环。然后引物全长退火温度做25个循环
赞一下(11人) 回复此楼
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
4楼2010-01-11 15:00:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiangchou812

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我用PCR克隆过五个片段，均使用2楼的方法。没有问题。但是三四楼的方法应该更好一点！
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2010-01-11 16:30:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

沙中清泉

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我一般直接以引物合成单上的Tm值为准，再减五度（赛百盛合成的引物），一般都能P出来
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2010-01-11 16:32:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sdspring

金虫 (初入文坛)
谢谢各位！

那么说要根据两种Tm值摸索两种退火温度喽？ 好像挺有难度的
赞一下 回复此楼
7楼2010-01-12 08:30:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sailormoon8623

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
恩，三楼的有道理，一般都是前5轮降5度，这样引物匹配得好
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2010-01-12 14:01:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 sdspring 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭