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生成元

木虫 (著名写手)

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[交流] 【求助】蛋白标记纳米颗粒提纯后重新分散时超声是否会影响标记的蛋白的活性

实验中用到蛋白标记纳米颗粒，提纯后重新分散时需要超声，请教超声是否会影响标记的蛋白的活性。

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1楼 2010-01-09 21:55:33

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dodogougou

铁杆木虫 (正式写手)

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★ ★ ★ ★ ★ ★
生成元(金币+4,VIP+0):说的很细谢谢！！ 1-17 18:56
薰衣草儿(金币+2,VIP+0):欢迎讨论~ 1-18 09:46

超声会影响标记蛋白的构像。要不要注意超声的问题，关键要看你标记的蛋白是用来干什么的——必须保留标记蛋白的活性吗？
我觉得用蛋白质标记纳米颗粒，发生团聚甚至严重团聚在所难免，用低功率超声恐怕也不会有很好的分散效果。不要说连接的是蛋白质这种结构复杂的分子，就是加入的是结构简单的同官能团双交联剂都容易引起严重团聚。

我说一下提取细胞总蛋白的时候要不要超声的问题，可能会有一定的参考作用吧！
从细胞中提蛋白的时候，
如果是用于SDS-PAGE当然没有关系，因为SDS会把蛋白质变成带大量负电荷的长棒状分子、有强变性作用，在后面的实验中也不会用到蛋白质的活性，所以可以大胆地超声。而且有必要超声，因为SDS裂解的时候会把核酸给释放出来，形成粘稠液体而影响后续实验，超声能有效地剪切核酸。
如果是用于抗原-抗体反应，那就需要看抗体了，这种情况下我是选择不超声。但是我认为：用多克隆抗体的话，提蛋白的时候超声丧失活性是没有关系的，因为总有识别线性结构蛋白质的抗体存在；用单克隆抗体、且抗体识别的是空间构型，提蛋白的时候还是不要超声了。

[ Last edited by dodogougou on 2010-1-17 at 19:09 ]