应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】土壤DNA做PCR
141/2返回列表12下一页
查看: 971  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

生物00

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】土壤DNA做PCR

我分别用普通方法和试剂盒提出DNA，没有纯化进行PCR.如果不加BSA全都P不出来，加了BSA后，用试剂盒提出的DNA能P出500bp的片段，普通方法的P不出来，但同时阴性对照也有500bp的带。我知道出阴性的原因是BSA带菌，但是为什么阴性都出了反而普通方法的P不出来呢？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2010-01-08 17:42:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mever

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+1,VIP+0): 1-8 17:55
也许是你普通组的DNA里腐植酸的含量过高 影响了tag酶的活性 导致PCR反应结果不理想
赞一下(21人) 回复此楼
2楼2010-01-08 17:54:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

g0079

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by mever at 2010-1-8 17:54:
也许是你普通组的DNA里腐植酸的含量过高 影响了tag酶的活性 导致PCR反应结果不理想

有没有什么方法能让普通组的也P出来呢
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-01-08 18:09:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

g0079

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by g0079 at 2010-1-8 18:09:

有没有什么方法能让普通组的也P出来呢

加BSA不是可以保护Taq吗
赞一下 回复此楼
4楼2010-01-08 18:10:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1514132

至尊木虫 (著名写手)
是不是和Taq的活性有关系啊？
赞一下 回复此楼
5楼2010-01-08 18:16:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

g0079

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 1514132 at 2010-1-8 18:16:
是不是和Taq的活性有关系啊？

文献上用普通方法提出的DNA直接用通用引物都能P出来，我P不出来
我用的还是带GC加的引物，为了以后做DGGE,郁闷死，为什么土里的DNA问题那么多
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2010-01-08 18:23:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mever

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by g0079 at 2010-1-8 18:09:

有没有什么方法能让普通组的也P出来呢

可以尝试将DNA纯化 降低腐植酸的污染
不少文献有纯化的方法 市场上也有纯化试剂盒卖
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2010-01-08 18:31:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1514132

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by g0079 at 2010-1-8 18:23:

文献上用普通方法提出的DNA直接用通用引物都能P出来，我P不出来
我用的还是带GC加的引物，为了以后做DGGE,郁闷死，为什么土里的DNA问题那么多

可能是土壤中的成分很复杂吧！您想一想，那么多微生物共同生存，这之间一定有很多秘密是我们没有发现的，呵呵
赞一下 回复此楼
8楼2010-01-08 18:32:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luckyyan

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
那么你自己的引物是什么条件啊？扩出来的应该是多大的片段，好多因素导致你的实验失败。可以逐一排除。
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2010-01-08 18:40:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

unameder

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
记得以前根据文献的方法提DNA，条带很不明显，死活也P不出来，后来换用试剂盒，好像叫北京百泰克，50次1千多块，效果挺好，提前的DNA带很明显，PCR没加BSA也可，AFLP迎刃而解
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2010-01-08 20:31:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 生物00 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭