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【求助/交流】扫描电镜生物样品制备方法
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请教各位大虾，欲对培养细胞体进行扫描电镜观察，求样品制备方法。 之前曾做个一次，效果不好，因本细胞体带鞭毛，样品经处理后鞭毛丢失。 上次制样方法如下：离心——2.5%戊二醛固定——乙醇梯度脱水——加入媒介剂——二氧化碳临界点干燥——镀金膜——观察。 离心后细胞体团集在一起造成鞭毛脱落，因此想将细胞体分散固定在盖玻片上进行观察。因此请教各位有经验的同志分享一下实验经验。谢谢！ 此外，样品干燥这一步能否使用冷冻干燥法或其他可以替代二氧化碳临界点干燥法。 |
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2楼2010-01-08 11:31:05
tianpingpe
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① 2.5%的戊二醛固定2h。 ② 磷酸缓冲液（pH6.0，0.1M）清洗2-3次，每次15-30min。 ③ 1%锇酸固定1h，蒸馏水清洗4次，每次15-30min。 ④ 2%单宁酸处理2-24h（单宁酸能和锇酸结合，增加电子反差，增加更多锇酸分子与样品分子的结合）。 ⑤ 蒸馏水清洗4次，每次15-30min。 ⑥ 1%锇酸固定1h，蒸馏水清洗4次，每次15-30min。 ⑦ 脱水：分别用50%、70%、80%、100%、100%的乙醇处理10min。 ⑧ 叔丁醇-乙腈干燥法：75%叔丁醇，20min；100%叔丁醇，10min；叔丁醇-乙腈（2:1），10min；叔丁醇-乙腈（1:1），10min；乙腈（100%），10min。 ⑨ 离子度膜。 ⑩ 扫描电镜观察。 这个是我们做真菌的步骤，希望对你有帮助 |
3楼2010-01-08 11:50:31
yaodeyaode
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4楼2010-01-09 13:08:57
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