24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 799  |  回复: 6
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

mss332003

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】测序结果有酶切位点,但却切不出来

最近在做载体构建,我将270bp的目的片段,两端带 EcoR I 酶切位点,连接在表达载体上,经过PCR鉴定和公司测序显示连接上的序列是正确的,而且酶切位点也在,可是我把提出的质粒再酶切却怎么也切不开,用EcoR I 专用的buffer 也不行, 愁啊!!请亲爱的朋友们帮忙想想办法吧,先谢谢各位了啊!

[ Last edited by mss332003 on 2010-1-7 at 10:21 ]
回复此楼
不要因为也许会分离,就不敢求一次倾心的相遇。
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mss332003

铜虫 (初入文坛)

谢谢!

引用回帖:
Originally posted by tianpingpe at 2010-1-7 10:48:
1.检查你的酶是否有问题,拿其他质粒切一下,检查一下
2,重新提取质粒

酶没有问题,质粒也没问题,想其他办法了
不要因为也许会分离,就不敢求一次倾心的相遇。
5楼2010-01-08 15:07:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

tianpingpe

新虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1.检查你的酶是否有问题,拿其他质粒切一下,检查一下
2,重新提取质粒
2楼2010-01-07 10:48:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你的质粒多大,切下来的片段有点小,片段太小了,即使切开了也不应定能看出来,确实有点困难啊,建议加大载体量,即使有切不开的不要紧,反正有切下来得就行。
    你切下来是干嘛用啊,如果只是为了验证,建议用EcoR I 酶和载体上的另外一个酶切位点,使切下来的片段大点就好看了。
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
3楼2010-01-07 11:35:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

powerfulliu

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
还有一种可能,你的质粒EcoRI位点在宿主体内被甲基化了。要验证是不是这个原因,可以将这一段用PCR扩增出来再酶切,看能否切开。或者将质粒转入无甲基化的宿主后再抽提出来切个试试。Good luck!
4楼2010-01-07 13:24:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085600材料与化工调剂 5+3 孜孜不倦2002 2026-04-19 6/300 2026-04-20 21:25 by babero
[考研] 320求调剂 +6 深郊akm 2026-04-17 6/300 2026-04-20 18:57 by fs26jie
[论文投稿] 期刊推荐 +3 材料研究生 2026-04-15 5/250 2026-04-20 16:02 by 豆豆7758
[论文投稿] 有没有接收比较快的sci期刊呀,最好在一个月之内的,研三孩子求毕业 20+4 之护着 2026-04-16 7/350 2026-04-20 15:45 by 豆豆7758
[教师之家] 又一批高校组建人工智能学院 师资行吗 不是骗人吗 +4 yexuqing 2026-04-19 4/200 2026-04-20 14:47 by brantleo
[考研] 297,工科调剂?河南农业大学本科 +15 河南农业大学-能 2026-04-14 15/750 2026-04-20 12:39 by Equinoxhua
[考博] 申博/考博 +4 啃面包的小书虫 2026-04-17 5/250 2026-04-20 10:47 by YuY66
[考博] 申博 +3 Xyyx. 2026-04-18 3/150 2026-04-20 10:44 by YuY66
[考研] 294求调剂 +8 淡然654321 2026-04-17 9/450 2026-04-19 19:51 by Equinoxhua
[考研] 291求调剂 +11 关忆北. 2026-04-14 11/550 2026-04-19 17:16 by 中豫男
[考研] 求调剂 +10 小聂爱学习 2026-04-16 12/600 2026-04-19 16:51 by 中豫男
[考研] 085404 22408 309分求调剂 +10 lzmk 2026-04-14 11/550 2026-04-19 16:42 by 中豫男
[考研] 求调剂 +6 苦命人。。。 2026-04-18 7/350 2026-04-19 16:27 by 中豫男
[考研] 297,工科调剂? +5 河南农业大学-能 2026-04-14 5/250 2026-04-18 15:17 by Equinoxhua
[考研] 收到复试调剂但是去不了 +8 小蜗牛* 2026-04-16 8/400 2026-04-18 11:15 by zixin2025
[考研] 260求调剂 +4 Zyt1314520.. 2026-04-17 5/250 2026-04-18 08:28 by babysonlkd
[考研] 一志愿华中农业071010,320求调剂 +17 困困困困坤坤 2026-04-14 19/950 2026-04-17 20:08 by 关一盏灯cd
[考研] 322求调剂 +6 tekuzu 2026-04-17 6/300 2026-04-17 13:48 by Espannnnnol
[考研] 一志愿沪9,生物学326求调剂 +9 刘墨墨 2026-04-15 9/450 2026-04-16 17:14 by 崔崔崔cccc
[考研] 一志愿A区211,22408 321求调剂 +6 随心所欲☆ 2026-04-15 7/350 2026-04-15 21:45 by lbsjt
信息提示
请填处理意见