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十年一剑888

金虫 (小有名气)

[交流] 急!提取DNA遇到的问题

我提取真菌的DNA ,在用异丙醇将DNA沉淀后,在离心管的底部出现了挺多的白色沉淀(我觉得那就是DNA了),可是在我用70% 的酒精洗过两遍之后出现了以前从未出现的问题:加入1×TE缓冲液后,白色沉淀竟然不溶解!
    难道这些白色沉淀不是DNA?如果不是DNA,那么它会是什么物质(我曾用苯:氯仿:异戊醇=25:24:1的溶液抽屉过两次,已经不再有沉淀)?
   如果是DNA,它为什么不溶呢?以前提取DNA ,都能溶解,而且条带很亮。
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xjxlovelxl(金币+0,VIP+0):http://emuch.net/bbs/viewthread.php?tid=1644147&fpage=1 1-17 19:23
2楼2010-01-07 09:37:16
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edward12101759

金虫 (正式写手)

有可能是处理的有问题,
以前做过DNA提取,离心之后的白色沉淀一般就是DNA。
可能有其他物质的影响或者缓冲液可能有问题。
没遇到过,不太好说。
3楼2010-01-07 09:39:18
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十年一剑888

金虫 (小有名气)

溶解DNA的TE缓冲液我也换过了,还是不溶阿!
4楼2010-01-07 10:14:24
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xjxlovelxl(金币+0,VIP+0):http://emuch.net/bbs/viewthread.php?tid=1644147&fpage=1 1-17 19:24
5楼2010-01-07 10:14:51
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駱寒

银虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★
十年一剑888(金币+5,VIP+0): 1-7 12:06
不是DNA,我前段时间才提的DNA,dNA应该是絮状沉淀,有点粘糊糊的感觉。可能里面含有DNA,但大部分是酚类等其他的杂质,抽提也不能避免的,要加点别的物质,PVP之类的。若果真有dNA,就算它不完全溶解(里面的dNA已经溶解了,剩下的是杂质),你跑电泳也能看到条带的。如果完全看不到条带,那就要加一些去杂质的东西重新提取了
我不懒
6楼2010-01-07 10:22:47
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zdmei

金虫 (小有名气)

可能是蛋白,抽提时还是一定要少吸些上清
或者可能是盐
如果觉得操作没问题,沉淀是半透明的话,就延长溶解时间4度过夜或24h
7楼2010-01-13 17:44:37
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