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青青草hwj

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】引物二聚体

各位友们,我跑的PCR总出现引物二聚体,请问怎么去除哦,用的退火温度是引物的退火减5度,要增加退火温度么?谢谢啦
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gn2003_0

金虫 (小有名气)

可能原因
1、引物设计不合理
2、模板浓度过小,适当加大模板量,增加引物和模板结合的机会
3、Taq酶,引物,Mg2+浓度可能过高,可降低它们的浓度
4、增加循环数
5、退火温度较低有条带,则应逐渐提高温度,若提高温度的同时产物量减少,则考虑增加镁离子浓度(根据扩增片断长度而定,片段长则相应镁离子浓度应该高一些)最可能原因
16楼2010-01-20 15:32:03
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


amisking(金币+1,VIP+0): 1-7 16:51
能扩出来就增
如果不是做RT半定量,下游可以割胶的,都不怕dimer啦~
2楼2010-01-07 09:04:21
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cato8163

银虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+3,VIP+0): 1-7 16:51
小可认为,引物二聚体有关的有:1.退火温度。建议你做个梯度PCR。2.引物加量,引物加量为:0.2--0.4(10uL体系),引物浓度为10uM/L,当加0.2时,就比0.4引物二聚体少很多。3.用的酶。这就看你买的了酶的特性了。4.操作。在冰上操作。
3楼2010-01-07 09:05:27
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1,VIP+0):谢谢交流 1-7 19:16
引用回帖:
Originally posted by cato8163 at 2010-1-7 09:05:
小可认为,引物二聚体有关的有:1.退火温度。建议你做个梯度PCR。2.引物加量,引物加量为:0.2--0.4(10uL体系),引物浓度为10uM/L,当加0.2时,就比0.4引物二聚体少很多。3.用的酶。这就看你买的了酶的特性了。4 ...

很有道理,二聚体主要是提高退火温度,和降低引物用量就可以减少,不过一般也不影响实验,除非定量PCR
4楼2010-01-07 09:15:30
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