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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】引物二聚体
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青青草hwj

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】引物二聚体

各位友们，我跑的PCR总出现引物二聚体，请问怎么去除哦，用的退火温度是引物的退火减5度，要增加退火温度么？谢谢啦
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1楼2010-01-07 08:28:58
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 刘超_2009 at 2010-1-8 09:43:

疑惑：用量降低了后，在P时是不是影响它的扩增效果啊?倒觉得增加模板浓度，同时适当降低引物浓度也可以达到效果吧，让更多的模板去竞争引物，这样引物的二聚化现象会减少些

形成二聚体还可以扩增出来，就说明引物还是相对过量的，只能适当减少，当然不能减少太多，不然扩增效率是会受到影响的
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12楼2010-01-08 11:03:31
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
amisking(金币+1,VIP+0): 1-7 16:51
能扩出来就增
如果不是做RT半定量，下游可以割胶的，都不怕dimer啦~
赞一下(20人) 回复此楼
2楼2010-01-07 09:04:21
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cato8163

银虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+3,VIP+0): 1-7 16:51
小可认为，引物二聚体有关的有：1.退火温度。建议你做个梯度PCR。2.引物加量，引物加量为：0.2--0.4（10uL体系），引物浓度为10uM/L,当加0.2时，就比0.4引物二聚体少很多。3.用的酶。这就看你买的了酶的特性了。4.操作。在冰上操作。
赞一下(21人) 回复此楼
3楼2010-01-07 09:05:27
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1,VIP+0):谢谢交流 1-7 19:16
引用回帖:
Originally posted by cato8163 at 2010-1-7 09:05:
小可认为，引物二聚体有关的有：1.退火温度。建议你做个梯度PCR。2.引物加量，引物加量为：0.2--0.4（10uL体系），引物浓度为10uM/L,当加0.2时，就比0.4引物二聚体少很多。3.用的酶。这就看你买的了酶的特性了。4 ...

很有道理，二聚体主要是提高退火温度，和降低引物用量就可以减少，不过一般也不影响实验，除非定量PCR
赞一下(11人) 回复此楼
4楼2010-01-07 09:15:30
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