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【求助】关于高效液相末端吸收的问题
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| 想请教一个问题,在做HPLC时 ,检测波长为220,属于末端吸收,这时我的流动相里能加酸吗?流动相为酸水,乙腈.之前加过0.2%磷酸,没有问题,现在加0.5%的乙酸和0.5%甲酸,用流动相平衡时,基线都会上下波动,波动的很厉害.为什么呢 |
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首先明确一下什么是末端吸收：指的是流动相在紫外短波段的吸收。描述一种溶剂的末端吸收常用其截止波长描述。溶剂的紫外截止波长指当小于截止波长的辐射通过溶剂时，溶剂对此辐射产生强烈吸收，此时溶剂被看作是光学不透明的，它严重干扰组分的吸收测量。其测量是将溶剂装入1cm的比色皿，以空气为参比，逐渐降低入射波长，溶剂的吸光度A＝1时的波长称为溶剂的截止波长。也称极限波长。 然后再看为什么加磷酸没有问题而加甲酸和乙酸有问题，因为甲酸和乙酸含有官能团-COOH，这是一个发色官能团，在200nm左右有吸收，二磷酸不存在这样的结构，因而影响不大。根据楼主提供的情况来看检测波长为220nm，甲酸/乙酸影响应该不太大才对。 基线上下波动跟很多条件都有关系：柱温波动；流动相不均匀；流通池被污染；系统内有气泡；色谱柱填料流失或阻塞等等。所以，不一定就是由甲酸和乙酸引起的，基线波动的问题还需要楼主仔细多多排查。 |
2楼2010-01-06 21:32:42
doraemon3280
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3楼2010-01-07 09:23:47
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gretea
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6楼2010-01-24 21:04:39
2楼说的很好。。再看看你的柱子能不能用这么大浓度的乙酸。。 7楼2010-01-25 12:36:26
kangroo-no1
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10楼2010-01-28 21:35:32