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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】EB染色DNA后，紫外下分解问题？
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haverain

金虫 (正式写手)

MR

[交流] 【求助/交流】EB染色DNA后，紫外下分解问题？

用EB染了DNA，EB浓度很大，一开始条带清晰，但是置于紫外灯下观察切胶，发现一两分钟内条带亮度明显变小，以至于看不清切胶。有么有同志遇到类似情况？
现在怀疑的情况有：EB变质；紫外灯功率太大等等。？？？？谢谢了
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虚心请教，认真学习！
1楼 2010-01-05 12:47:52
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09021122

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
1949stone(金币+4,VIP+0):很细致 1-5 15:19
haverain(金币+2,VIP+0):thanks 1-7 00:58
一：EB染色后在紫外灯下，DNA一般很少降解的  除非紫外很强。
二：结合到DNA链上的EB很少，大部分是不结合的。
三：在割胶时尽量一个一个的割，每隔一次，关闭紫外灯。
四：要迅速处理DNA样品。
五：割胶的紫外线不要太强！！！
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雄关漫道真如铁，而今迈步从头越
2楼2010-01-05 13:05:36
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haverain

金虫 (正式写手)

MR
引用回帖:
Originally posted by 09021122 at 2010-1-5 13:05:
一：EB染色后在紫外灯下，DNA一般很少降解的  除非紫外很强。
二：结合到DNA链上的EB很少，大部分是不结合的。
三：在割胶时尽量一个一个的割，每隔一次，关闭紫外灯。
四：要迅速处理DNA样品。
五：割胶的紫 ...

谢谢你，你主要觉得是紫外灯太强造成的是吧，我们也倾向于这样解释
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虚心请教，认真学习！
3楼2010-01-05 13:11:04
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09021122

木虫 (正式写手)
恩  我觉得应该是的，一般情况下，DNA是不容易分解的
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雄关漫道真如铁，而今迈步从头越
4楼2010-01-05 13:15:36
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
新配EB试试。
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Thank-you，so-blue.
5楼2010-01-05 13:19:07
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randomqd

木虫 (小有名气)

樱花骑士
★
1949stone(金币+1,VIP+0):谢谢 不过为什么呢？ 1-5 15:19
DNA尽量少暴露在紫外光下
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未来天空才是极限
6楼2010-01-05 13:36:55
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★
司马诸葛(金币+2,VIP+0): 1-5 21:51
haverain(金币+2,VIP+0): 1-7 00:59
紫外灯能够淬灭EB，所以EB原液、干粉才需要避光保存，这也是EB去污的一种方法。一些紫外透照台兼具长波和短波紫外，可以根据成像或者切胶的需要调节。

紫外能够使得DNA形成嘧啶二聚体，这些交联的碱基在复制的时候就会卡住，然后会被酶系随机插入一个碱基修复，造成突变。所以速度第一。
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7楼2010-01-05 15:25:01
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randomqd

木虫 (小有名气)

樱花骑士
LS说得对，紫外交联了对后序的克隆影响很大，有可能导致实验失败。。。
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未来天空才是极限
8楼2010-01-05 16:31:13
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-1-5 15:25:
紫外灯能够淬灭EB，所以EB原液、干粉才需要避光保存，这也是EB去污的一种方法。一些紫外透照台兼具长波和短波紫外，可以根据成像或者切胶的需要调节。

紫外能够使得DNA形成嘧啶二聚体，这些交联的碱基在复制的 ...

说得很详细了，很有道理，长时间暴露EB会淬灭。DNA也会被紫外灯打断，但即使断了条带还是在原来的位置，不会看不见的
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9楼2010-01-05 17:48:30
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刘超_2009

新虫 (小有名气)
★ ★
haverain(金币+2,VIP+0):谢谢交流 1-7 00:59
这两方面都有吧，估计是你开紫外灯的时间太长了，切一个开一个吧，再说EB浓度也不用那么高，它与DNA的结合与它的浓度没太大关系，适量就可以了。另外建议就是，操作尽可能快些
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10楼2010-01-06 10:44:46
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