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schi

木虫 (小有名气)

schi

[交流] 【求助/交流】克隆转化

   大家好, 现在实验遇到困难,请教下大家!!
现在想克隆测序2k作用的片段,用的是Takara的pMD19-T Vector ,大肠杆菌用的是DH5α的, 是不是这个载体连2K的片段很难啊?做了几次,挑的白斑检测也没有目的带?
  救助!!!!
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

★ ★
amisking(金币+2,VIP+0): 1-4 20:21
引用回帖:
Originally posted by schi at 2010-1-4 18:45:

我的目的片段是2k左右啊.检测后的目的片段很多在500bp 还有的是400bp。。
这个是什么原因啊?

连2Kb不存在问题。
连进去小片段?你做回收了吗?
Thank-you,so-blue.
4楼2010-01-04 19:27:57
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695

木虫 (职业作家)


amisking(金币+1,VIP+0): 1-4 20:21
这个应该很容易的,没什么难的啊,要是白斑多的话,做什么对照了没有呢、还是好好检查下体系的问题吧
2楼2010-01-04 18:41:19
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schi

木虫 (小有名气)

schi

引用回帖:
Originally posted by 695 at 2010-1-4 18:41:
这个应该很容易的,没什么难的啊,要是白斑多的话,做什么对照了没有呢、还是好好检查下体系的问题吧

我的目的片段是2k左右啊.检测后的目的片段很多在500bp 还有的是400bp。。
这个是什么原因啊?
3楼2010-01-04 18:45:11
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

★ ★ ★
amisking(金币+3,VIP+0): 1-4 20:31
连2kb的片段应该没有任何问题,只要你PCR回收没有什么问题的话,连接是没有问题的,你可以用15微升的体系连,16度 T4 DNA连接酶连接过夜再转化,不要用错抗体就行
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
5楼2010-01-04 20:28:23
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