24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 767  |  回复: 10
当前主题已经存档。

schi

木虫 (小有名气)

schi

[交流] 【求助/交流】克隆转化

   大家好, 现在实验遇到困难,请教下大家!!
现在想克隆测序2k作用的片段,用的是Takara的pMD19-T Vector ,大肠杆菌用的是DH5α的, 是不是这个载体连2K的片段很难啊?做了几次,挑的白斑检测也没有目的带?
  救助!!!!
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

695

木虫 (职业作家)


amisking(金币+1,VIP+0): 1-4 20:21
这个应该很容易的,没什么难的啊,要是白斑多的话,做什么对照了没有呢、还是好好检查下体系的问题吧
2楼2010-01-04 18:41:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

schi

木虫 (小有名气)

schi

引用回帖:
Originally posted by 695 at 2010-1-4 18:41:
这个应该很容易的,没什么难的啊,要是白斑多的话,做什么对照了没有呢、还是好好检查下体系的问题吧

我的目的片段是2k左右啊.检测后的目的片段很多在500bp 还有的是400bp。。
这个是什么原因啊?
3楼2010-01-04 18:45:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

★ ★
amisking(金币+2,VIP+0): 1-4 20:21
引用回帖:
Originally posted by schi at 2010-1-4 18:45:

我的目的片段是2k左右啊.检测后的目的片段很多在500bp 还有的是400bp。。
这个是什么原因啊?

连2Kb不存在问题。
连进去小片段?你做回收了吗?
Thank-you,so-blue.
4楼2010-01-04 19:27:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

★ ★ ★
amisking(金币+3,VIP+0): 1-4 20:31
连2kb的片段应该没有任何问题,只要你PCR回收没有什么问题的话,连接是没有问题的,你可以用15微升的体系连,16度 T4 DNA连接酶连接过夜再转化,不要用错抗体就行
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
5楼2010-01-04 20:28:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主

理论上你用蓝白斑筛选, 阳性率应该挺高的,pcr是不是条件不合适。要不你提质粒酶切看看吧,酶切要比PCR验证可靠,或者直接拿去测序
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
6楼2010-01-04 21:46:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)

是不是割胶回收后再连接的?据说不同的胶回收方法也影响连接的
漫洒英雄泪,相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行?一任俺芒鞋破钵随缘化!
7楼2010-01-04 22:20:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

schi

木虫 (小有名气)

schi

引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2010-1-4 19:27:

连2Kb不存在问题。
连进去小片段?你做回收了吗?

我PCR扩增的是一条特异的带啊。。是回收后连接的啊。。挑了不少白斑,检测的时候都不是目的条带啊。。
8楼2010-01-05 10:47:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuanbo934

至尊木虫 (著名写手)

转化效率低可能是你的目的片断和载体的比例不合适,一般在作完菌落PCR后要做酶切鉴定,用M13 引物作菌落PCR会好一些,如果它能做出来,测序肯定没问题.
9楼2010-01-05 11:03:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mcheng

铜虫 (初入文坛)

连接2K片段到克隆载体理论上不存在问题,我们成功将10K的片段连到克隆载体和表达载体上。您如果实在有问题可联系中美泰和生物公司,中美泰和是一家提供专业分子生物学服务的公司。您可上www.taihegene.com 网站上看看,也可直接联系 程敏: 13426089553
10楼2010-01-05 13:58:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 schi 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿211,335分,0856,求调剂院校和导师 +15 倾____萧 2026-03-27 16/800 2026-04-02 22:50 by JourneyLucky
[考研] 085600调剂 +3 1amJJ 2026-04-02 3/150 2026-04-02 22:00 by 科研小专家
[考研] 材料调剂 +7 一样YWY 2026-04-02 7/350 2026-04-02 21:49 by dongzh2009
[考研] 085601一志愿北理325分求调剂 +4 找调剂,, 2026-04-02 4/200 2026-04-02 21:29 by dongzh2009
[考研] 环境科学与工程334分求调剂 +7 王一一依依 2026-03-30 9/450 2026-04-02 21:15 by 1104338198
[考研] 一志愿山东大学,085600,344 +7 魏子per 2026-04-02 8/400 2026-04-02 21:12 by 百灵童888
[考研] 环境工程297分求调剂一志愿杭高院 +15 GENJIOW 2026-03-31 16/800 2026-04-02 17:56 by cyh—315
[考研] 372求调剂 +3 jj涌77 2026-04-02 3/150 2026-04-02 09:57 by olim
[考研] 一志愿安徽大学计算机科学与技术学硕,331分求调剂 +5 蒋昌鹏qtj 2026-04-01 5/250 2026-04-02 08:10 by fxue1114
[考研] 085600,320分求调剂 +5 大馋小子 2026-04-01 6/300 2026-04-01 19:40 by 唐沐儿
[考研] 材料科学与工程339求调剂 +11 hyz0119 2026-03-31 12/600 2026-04-01 18:40 by 伟大河北
[考研] 0710生物学考研调剂 +3 李多米lee. 2026-03-27 4/200 2026-04-01 16:21 by zzchen2000
[考研] 085404 22408 315分 +5 zhuangyan123 2026-03-31 6/300 2026-03-31 13:48 by limeifeng
[考研] 313求调剂 +6 卖个关子吧 2026-03-31 6/300 2026-03-31 10:58 by Jaylen.
[考研] 269求调剂 +4 我想读研11 2026-03-31 4/200 2026-03-31 10:04 by cal0306
[考研] 274求调剂 +6 xiao爱同学 2026-03-30 6/300 2026-03-31 10:04 by cal0306
[考研] 08工科求调剂286 +5 tgs_001 2026-03-28 5/250 2026-03-31 08:18 by 一只好果子?
[考研] 本科211总分289,08工学真心求调剂 +3 utopiaE 2026-03-30 3/150 2026-03-30 23:42 by ms629
[考研] 291求调剂 +5 Y-cap 2026-03-29 6/300 2026-03-29 13:18 by mumin1990
[考研] 一志愿上海理工能源动力(085800)310分求调剂 +3 zhangmingc 2026-03-27 4/200 2026-03-27 19:01 by 给你你注意休息
信息提示
请填处理意见